Самая новая лада 2018: 403 — Доступ запрещён
отзывы владельцев, плюсы и минусыLADA Granta 2022 на сайте Autospot.ru
LADA Granta Cross 1.6 MT
В восторге от машины, проехала всего 100 км, но нравится вообще всё, расход бензина, проходимость по снегу, внешний вид, вид салона, вид одометра и тахометра , сигнализацию мне поставил дилер великолепную , спас…
LADA Granta Cross — Лада рулит https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/review/4186/ В восторге от машины, проехала всего 100 км, но нравится вообще всё, расход бензина, проходимость по снегу, внешний вид, вид салона, вид одометра и тахометра , сигнализацию мне поставил дилер великолепную , спас…
Olga Fedorova
LADA
Granta 2022 LADA Granta Cross 2022 2018 – н.
5.0 0.1 5
LADA Granta седан 1.6 MT Standard
Весна на дворе.Белая цветовая гамма,становится грязно чёрной. Обнаружил желтые жирные размазанные очаги, непридал значения просто было неприятно. Но узнать таки пришлось позже выбирая уплотнители дверей и загля…
LADA Granta седан — Впечатления через неделю эксплуатации,ещё даже без номеров. https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/3289/ Весна на дворе.Белая цветовая гамма,становится грязно чёрной. Обнаружил желтые жирные размазанные очаги, непридал значения просто было неприятно. Но узнать таки пришлось позже выбирая уплотнители дверей и загля…
Андрей Харчевников
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5.0 0.1 4.3
LADA Granta Cross
Добрый день. Приобрели в декабре 2019 года в г.Туле гранту-кросс. Довольны, как подарками от авто салона, так и сейчас. Комплектация радует, особенно блютуз гарнитура и климат контроль. Это вам не просто кондици…
LADA Granta Cross — Гранта-кросс https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/review/3184/ Добрый день. Приобрели в декабре 2019 года в г.Туле гранту-кросс. Довольны, как подарками от авто салона, так и сейчас. Комплектация радует, особенно блютуз гарнитура и климат контроль. Это вам не просто кондици…
Александр Федин
LADA
Granta 2022 LADA Granta Cross 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/spec/
5.0 0.1 4
LADA Granta седан 1.6 MT Comfort
Машина нормальная. НО, приобретал автомобиль в Лермонтове 2-3 месяца назад, потеют задние фары, протекают задние стекла, жрет как мустанг, едешь и слышишь скрип высшего качества пластика, и скрип окон. А так маш…
LADA Granta седан — Гранта https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/3178/ Машина нормальная. НО, приобретал автомобиль в Лермонтове 2-3 месяца назад, потеют задние фары, протекают задние стекла, жрет как мустанг, едешь и слышишь скрип высшего качества пластика, и скрип окон. А так маш…
Георгий Кюльбякидис
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5.0 0.1 2.2
LADA Granta седан 1.6 MT
Всем доброго дня. Решил поделится мнением об авто лада гранта. Когда решил поменять авто долго думал какую именно друзья говорили приору бери классная, остальные калину, но как говорится на вкус и цвет товарища…
LADA Granta седан — Гранта.
Чудо или накозание?! https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/3174/ Всем доброго дня. Решил поделится мнением об авто лада гранта. Когда решил поменять авто долго думал какую именно друзья говорили приору бери классная, остальные калину, но как говорится на вкус и цвет товарища…Эдуард Заруцкий
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5.0 0.1 4
LADA Granta Drive Active 1.6 MT Drive Active
Взял 25 ноября 2019 г., проблем 0, багажник огромный для седана, ездил по кочкам — как по ровной дороге, не знаю как вы, но я советую брать.
LADA Granta Drive Active — Стоит ли брать Гранту FL? https://autospot.ru/brands/lada/grantadriveactive/sedan/review/3141/ Взял 25 ноября 2019 г., проблем 0, багажник огромный для седана, ездил по кочкам — как по ровной дороге, не знаю как вы, но я советую брать…
Роман Леонтьев
LADA
Granta 2022 LADA Granta Drive Active 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/grantadriveactive/sedan/spec/
5.0 0.1 3.7
LADA Granta седан 1.6 MT
Не рекомендую покупать автоваз и данный сервис. Купили в декабре 2019г. Машина начала сыпаться на 5000км, на 20.000 погнуты тормозные диски, шумит сцепление, вибрация при торможении. Порвалась дверная резинка. П…
LADA Granta седан — Не покупайте #овноваз. Поберегите свои деньги и нервы https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/3105/ Не рекомендую покупать автоваз и данный сервис. Купили в декабре 2019г. Машина начала сыпаться на 5000км, на 20.000 погнуты тормозные диски, шумит сцепление, вибрация при торможении. Порвалась дверная резинка. П…
Ирина Владимировна
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н. в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5.0 0.1 1
LADA Granta седан
Машина за свои деньги хорошая,но коробку передач за все это время АвтоВАЗ та и не победили. Есть не приятное переключения на 2 передачу….
LADA Granta седан — Гранта https://autospot.ru/brands/lada/granta_generation/sedan/review/2952/ Машина за свои деньги хорошая,но коробку передач за все это время АвтоВАЗ та и не победили. Есть не приятное переключения на 2 передачу….Иван Кислов
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2011 – 2018, I https://autospot. ru/brands/lada/granta_generation/sedan/spec/
5.0 0.1 4.3
LADA Granta седан
LADA Granta седан — Ценный подарок от любимого мужа https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/2826/ Мы с мужем женаты уже 11 лет. Всё это время я ездила на его машине. Он отвозил меня в салон на процедуры, в бассейн и тренажерный зал, завозил к родителям, когда я хотела их навестить. Как-то муж уехал в команди…
Евгения Смирнова
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5.0 0.1 4.7
LADA Granta седан
Привет всем автолюбителям! Хочу поделиться впечатлениями от эксплуатации всеми известной модели – Лада Гранта. До Гранты лет 17 ездил на старенькой Тойоте Корона. Машина меня полностью устраивала: относительно…
LADA Granta седан — Лада не так проста, как кажется https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/2824/ Привет всем автолюбителям! Хочу поделиться впечатлениями от эксплуатации всеми известной модели – Лада Гранта. До Гранты лет 17 ездил на старенькой Тойоте Корона. Машина меня полностью устраивала: относительно…
Евгений Гринев
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5.0 0.1 3.5
LADA Granta Cross
Многие говорят, в Lada Granta Cross ничего не поменялось. А я заявляю с уверенностью – поменялось и многое. Что действительно стало другим в этом автомобиле, так это роботизированная коробка. Получив новую проши…
LADA Granta Cross — Изменения на лицо https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/review/2820/ Многие говорят, в Lada Granta Cross ничего не поменялось. А я заявляю с уверенностью – поменялось и многое. Что действительно стало другим в этом автомобиле, так это роботизированная коробка. Получив новую проши…
Захар Савельев
LADA
Granta 2022 LADA Granta Cross 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/spec/
5.0 0.1 4.3
LADA Granta Cross
Lada Granta Cross – хочу поделиться впечатлениями об интерьере и экстерьере. По всему остальному выражать свои исключительно предвзятые мысли, думаю, не имеет смысла. Данная ниша полностью себя оправдывает и реа…
LADA Granta Cross — Лада Гранта Кросс – обновленный и улучшенный универсал https://autospot. ru/brands/lada/granta_cross/wagon/review/2817/ Lada Granta Cross – хочу поделиться впечатлениями об интерьере и экстерьере. По всему остальному выражать свои исключительно предвзятые мысли, думаю, не имеет смысла. Данная ниша полностью себя оправдывает и реа…
Касьян Сорокин
LADA
Granta 2022 LADA Granta Cross 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/spec/
5.0 0.1 4.2
LADA Granta седан
К отечественному автопрому всегда относился с презрением. Считал, что наши конструкторы ничего толкового разработать не могут. Надоело слушать мнения других и решил прочувствовать на своей шкуре, что такое чудо. ..
LADA Granta седан — За что заплатил, то и получил https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/2814/ К отечественному автопрому всегда относился с презрением. Считал, что наши конструкторы ничего толкового разработать не могут. Надоело слушать мнения других и решил прочувствовать на своей шкуре, что такое чудо…
Леонид Волков
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5.0 0.1 3.8
LADA Granta седан
К Гранте стал присматриваться несколько лет назад, когда эта марка стала реально самой продаваемой машиной. Для меня это не только признак популярности, но и прямой указатель на то, что запчастей будет много и о…
LADA Granta седан — Доступная машина https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/2773/ К Гранте стал присматриваться несколько лет назад, когда эта марка стала реально самой продаваемой машиной. Для меня это не только признак популярности, но и прямой указатель на то, что запчастей будет много и о…
Аркадий Субботин
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5. 0 0.1 4
LADA Granta Cross
Свою гранту я приобрёл всего три месяца назад, только завершил обкатку и прошёл нулевое ТО. Первые впечатления от машины очень положительные, так и хочется сказать: «Могут же, когда хотят». Во-первых, внешний ви…
LADA Granta Cross — Бюджетный семейный автомобиль https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/review/2555/ Свою гранту я приобрёл всего три месяца назад, только завершил обкатку и прошёл нулевое ТО. Первые впечатления от машины очень положительные, так и хочется сказать: «Могут же, когда хотят». Во-первых, внешний ви…
Николай Кузьменко
LADA
Granta 2022 LADA Granta Cross 2022 2018 – н. в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/spec/
5.0 0.1 4.7
LADA Granta лифтбек 1.6 MT Люкс
Кто бы что не говорил, Гранта- отличная машина, особенно лифтбек. Да, простой салон, да все в ней сделано дешево, но я на ней уже почти 100 тысяч километров откатался и меняю только расходники. Динамики в ней хв…
LADA Granta лифтбек — Отличная машина! https://autospot.ru/brands/lada/granta_generation/liftback/review/890/ Кто бы что не говорил, Гранта- отличная машина, особенно лифтбек. Да, простой салон, да все в ней сделано дешево, но я на ней уже почти 100 тысяч километров откатался и меняю только расходники. Динамики в ней хв…
Павел Н.
LADA
Granta 2022 LADA Granta лифтбек 2022 https://autospot.ru/brands/lada/granta_generation/liftback/spec/
5.0 0.1 4
LADA Granta лифтбек 1.6 MT Люкс
В декабре, 2 года назад, решила заменить свою Ладу Калину, на что-то более красивое. Еще отталкивалась от размера багажника и цены. Конечно, хотелось бы ездить на Лексусе или Рэндж Ровере, но, к сожалению, финан…
LADA Granta лифтбек — Гранта — устраивает полностью! https://autospot.ru/brands/lada/granta_generation/liftback/review/889/ В декабре, 2 года назад, решила заменить свою Ладу Калину, на что-то более красивое. Еще отталкивалась от размера багажника и цены. Конечно, хотелось бы ездить на Лексусе или Рэндж Ровере, но, к сожалению, финан…
Zhenya Kolesov
LADA
Granta 2022 LADA Granta лифтбек 2022 https://autospot.ru/brands/lada/granta_generation/liftback/spec/
5.0 0.1 4.3
LADA Granta Cross 1.6 MT Comfort
В конце весны 2019 года купил Ладу Гранту Кросс в рыжем цвете Аурум. Оформлял предзаказ, поэтому одним из первых сел за руль этого красавца. Выбрал комплектацию Комфорт. Заплатил около 600 тыс. Движок 1,6 литра,…
LADA Granta Cross — Речь не о понтах https://autospot. ru/brands/lada/granta_cross/wagon/review/1991/ В конце весны 2019 года купил Ладу Гранту Кросс в рыжем цвете Аурум. Оформлял предзаказ, поэтому одним из первых сел за руль этого красавца. Выбрал комплектацию Комфорт. Заплатил около 600 тыс. Движок 1,6 литра,…
Pier Cardin
LADA
Granta 2022 LADA Granta Cross 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/spec/
5.0 0.1 4.7
LADA Granta седан 1.6 MT Comfort
Автомобиль Lada Granta покупал для поездок в деревню, поэтому при выборе машины понравился тот факт, что салон очень вместительный. Комплектацию выбрал самую максимальную – Люкс. На тот момент в 2014 году она ст…
LADA Granta седан — Лада Гранта для поездок в деревню самое то https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/review/1779/ Автомобиль Lada Granta покупал для поездок в деревню, поэтому при выборе машины понравился тот факт, что салон очень вместительный. Комплектацию выбрал самую максимальную – Люкс. На тот момент в 2014 году она ст…
Олег Рязанцев
LADA
Granta 2022 LADA Granta седан 2022 2018 – н.в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta/sedan/spec/
5.0 0.1 4. 3
LADA Granta Cross 1.6 RT Comfort
Долго присматривался к гранте и решил все же поверить в наш автопром. Кстати, не ошибся. Машиной полностью доволен. Пересел со старенькой иномарки, которая вымотала душу и кошелек частыми ремонтами. Стоил выбор…
LADA Granta Cross — Первые дни владения мрачные, потом ничего https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/review/1988/ Долго присматривался к гранте и решил все же поверить в наш автопром. Кстати, не ошибся. Машиной полностью доволен. Пересел со старенькой иномарки, которая вымотала душу и кошелек частыми ремонтами. Стоил выбор…
Максименко
LADA
Granta 2022 LADA Granta Cross 2022 2018 – н. в., I Рестайлинг https://autospot.ru/brands/lada/granta_cross/wagon/spec/
5.0 0.1 5
Что получила и чего лишилась «Лада Гранта» после обновления?
«Лада Гранта» — один из самых продаваемых автомобилей на отечественном рынке, но дизайн модели выбивается из новой корпоративной стилистики. А ещё у АвтоВАЗа есть более дорогое семейство «Лада Калина», автомобили которого продаются неважно. Что делать в такой ситуации? Как ни странно, нашёлся способ убить сразу двух зайцев: отправить имя с двадцатилетней историей на покой, причесать все четыре кузова (седан, лифтбек, хэтчбек и универсал) под одну гребёнку в актуальном дизайне и назвать все версии «Грантами». В общем, рестайлинг не стал пустой формальностью и принёс немало изменений.
Внешний вид
Естественно, первый и самый заметный пункт в списке новшеств — дизайн. Общая для всех вариантов кузова черта — новая передняя часть в «икс-стиле», причём под списание пошли многие старые кузовные элементы: крылья, бампер, решётка радиатора, фары, капот. Указатели поворота, как и раньше, у машин в младших комплектациях находятся в крыльях, а в «люксовых» версиях — в зеркалах заднего вида.
Бампер обзавёлся хромированными элементами, проходящими, как у «Икс-рея», над противотуманными фарами. На решётке красуется огромная обновлённая ладья эмблемы. Основным блок-фарам досталась модная чёрная подложка, которая раньше была характерна только для «Калины». Секций три: габаритный огонь, указатель поворота и объединённый отражатель под лампу Н4 для ближнего и дальнего света.
Капот по-прежнему размещается между крыльями, а не лежит на них, как у «Весты», но изменилась общая геометрия передней части. Если раньше для «Гранты» был характерен короткий капот и покатая решётка радиатора, то теперь последняя стоит более вертикально, а капот, соответственно, стал длиннее, заодно сделав более стремительным облик машины в целом. К тому же там больше нет форсунок стеклоомывателя, которые переехали на «жабо», поближе к «дворникам». Двери, крыша и задние крылья остались нетронутыми, ибо менять их дорого.
А вот перемены в задней части неравные. Бывшие «калиновские» кузова явно обделили. У них лишь исчезла выштамповка под фирменный значок на двери багажника, на месте которой теперь красуется размашистая надпись «LADA». Лифтбеку повезло чуть больше: он кроме этого разжился другим бампером с изменившейся формой чёрной вставки в нижней части, видимо, призванной немного визуально облегчить вид сзади. На фоне этого реформа кормы седана выглядит пиром на весь мир — здесь кроме бампера ещё и полностью новая крышка багажника довольно затейливого дизайна, на которую переселили и номерной знак. Все версии кузова получили электрическую кнопку на крышке или двери багажника.
В салоне
Первое, на что обращаешь внимание в салоне — это сиденья. Сперва замечаешь тканевую обивку с рисунком в стиле «Весты Кросс», когда усядешься, понимаешь, что изменились и профиль самого сиденья, и форма подголовника. Пока трудно сказать, насколько удобнее стало водителю, и стало ли: нужно поездить по разным дорогам и в разных режимах, чтобы сделать окончательные выводы.
А вот вернувшаяся из небытия регулировка сиденья по высоте — однозначное благо. К тому же сделана она по-человечески, достаточно покачать рычагом. Подпрыгивать, как в «Логане» первого поколения, не нужно. Жаль было, что её в своё время отобрали у «Калины,» но спасибо, что вернули. Ещё бы боковые подушки безопасности получить. Эх, мечты, мечты… Но, увы, их забрали Datsun on-DO и mi-DO и делиться не хотят.
Перед глазами знакомый по ушедшим «Калине» и «Приоре» руль с новой эмблемой, за ним — комбинация приборов с прежней компоновкой (спидометр и тахометр с дисплеем между ними), но новая в деталях. Шкалы — с оранжевым ободком, белой подсветкой и радиальной оцифровкой. Дисплей в тон, к тому же, наконец-то, с инверсией (светятся только цифры). Компоновка данных также поменялась.
Передняя панель взята у «Калины» (причём ещё до рестайлинга она уже успела занять своё место в топовых комплектациях «Гранты») и изменена в деталях: у панели управления климатом новое обрамление в исполнении с климатической системой (которой также поделилась бывшая «Калина»), щеголяющее серебристой вставкой в тон рулю, облицовка центральных дефлекторов обзавелась рельефным «иксом», а у накладок над «бардачком» и монтажным блоком слева от руля новый рисунок. Ручки управления «автоматом» и роботизированной коробкой остались прежними, а вот рычагом для «механики» поделилась «Веста». И на сладкое самое главное: новый «ручник»! Да, теперь у трамвайно-диванных экспертов отобрали повод для дискуссий, ведь именно из-за этого «Гранта» и «Калина» не могли считаться автомобилями!
Техническая «начинка»
По технике изменений не так много, но это не умаляет их значимости. Например, исчез страшный ночной кошмар владельцев, пугающий сильнее, чем Фредди Крюгер, Джейсон Вурхиз и логотип телекомпании «ВИД» — история под названием «при обрыве ремня ГРМ, заклинивании роликов или помпы клапаны встретятся с поршнями». Не встретятся. Отныне и восьмиклапанные, и шестнадцатиклапанные двигатели объёмом 1,6 литра комплектуются новыми поршнями со специальными выемками, которые не дадут случиться крупным неприятностям.
В механической трансмиссии — главная пара с передаточным отношением 3,9 вместо 3,7, вторую передачу также сделали немного «короче», приблизив её к первой, облегчив жизнь синхронизаторам и обеспечив более плавный разгон. Автомат обошёлся без перемен, а вот «робота», похоже, довольно успешно учат ездить. Теперь он умеет «ползти» при отпущенной педали тормоза на манер классической гидромеханики, имеет спортивный и зимний режимы. Первый, как несложно догадаться, предусматривает улучшенное быстродействие, возможно, немного в ущерб комфорту, а второй даёт возможность тронуться со второй передачи, чтобы избежать пробуксовок на скользком покрытии.
Что в минусе?
Всё вроде замечательно. Думаете, где-то есть подвох? Не бывает ничего идеального? Правильно думаете. Серьёзных потерь нет, но всё же кое-что при обновлении исчезло вместе с именем «Калина». Не зря она стоила немного дороже…
Во-первых, это фары. Хороший свет является залогом комфорта и безопасности передвижения в ночное время и в условиях недостаточной видимости, и у «Калины» он был, без преувеличения, великолепным, одним из лучших в классе (где большинство машин раза в полтора дороже), не в последнюю очередь благодаря раздельным отражателям для ближнего и дальнего света под лампы Н7 и Н1. «Гранта» всегда уступала по этому показателю, и обновлённая модель тоже не дотянется до «Калины».
Во-вторых, наполнение комплектаций. Каким именем семейство назвали, от той машины комплектации и взяли. А это значит, что теперь только в «люксе» можно получить климат-контроль, центральный замок с дистанционным управлением, регулировку передних ремней безопасности по высоте, уплотнители по низу дверей, пластиковую облицовку порогов. Более того, если захочется управлять замками дистанционно и поставить стороннюю охранную систему, просто так вы этого не сделаете, потому что полный набор концевиков дверей тоже есть где? Правильно, только в топовой версии. Для остальных извольте докупить все, кроме водительского. Иначе говоря, формату «сел-поехал» теперь соответствует только самая дорогая модификация.
В-третьих, дизайн. Конечно, обновлённое семейство весьма симпатично, да и к освежённой корме седана меньше претензий. Но многих расстраивает то, что ВАЗ лишается самобытности моделей.
В целом, рестайлинг семейства «Лада Гранта», определённо, удался. Машины приятны на вид, соответствуют корпоративному дизайну, приобрели полезные доработки. Отмеченные минусы особо не мешали продажам «Гранты», а теперь, с подмогой в виде ещё двух типов кузова, она наверняка надолго захватит первое место на российском рынке. Тем более цены на автомобили выросли несильно, а на некоторые версии даже снизились.
Чтобы следить за автомобильными новостями, подпишитесь на наши каналы в Телеграме или Яндекс-Дзене.
Новая LADA Granta седан 2022 года — комплектации, фото салона, технические характеристики
Новый двигатель LADA
* Двигатель доступен для моделей Granta (все модификации) и Largus (кроме Largus Cross)
Улучшения:
Максимальная мощность Крутящий момент Расход топлива Разгон Токсичность ЕВРО 5+
- Экстерьер
- Интерьер
- Комфорт
- Безопасность
НОВОЕ ПРОЧТЕНИЕ КЛАССИКИ
Современный, рациональный, комфортный. Седан со вместительным багажником, который гармонично вписан в стремительную форму кузова. Как тот самый костюм, который подходит к любой фигуре. Как фильм, который видели все: всегда интересный и по-новому актуальный.
Экстерьер
15» легкосплавные оригинальные диски
Контрастный стиль и выразительная форма спиц
Экстерьер
Большие зеркала
Гарантируют отличную обзорность
Экстерьер
Оптика
Эффективны ночью, эффектны днем
УЮТ ДЛЯ КАЖДОГО
О чем мечтает водитель? Сесть за руль и почувствовать,что автомобиль как будто создан специально для него. Чего ждет пассажир? Удобно устроиться в мягком кресле и расслабиться, глядя в окно. Просторный салон, практичные обивки. Мультимедиа с качественным звуком и информативным экраном. Эффективный кондиционер и прекрасная обзорность. Из множества этих деталей складывается комфорт для каждого как в короткой поездке, так и в длительном путешествии.
Интерьер
Автоматическая трансмиссия
Настроена на комфорт и динамику
Интерьер
Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
Безопасность под контролем
КОМФОРТ БЕЗ КОМПРОМИССОВ
Привычно,понятно и эргономично — в этом автомобиле чувствуешь себя как дома. Фамильная черта LADA Granta — мягкие, удобные передние сиденья с широким диапазоном продольной регулировки: такой салон с готовностью примет человека любого роста. Каждая кнопка и рукоятка — на своем месте, и все настроено на комфорт и практичность — от хорошо читаемой подсветки приборов до эффективного пакета шумоизоляции. От селектора коробки передач до кнопки открывания багажника.
Комфорт
Электропривод
Обогреваемые наружные зеркала оснащаются электроприводом
Комфорт
Круиз-контроль
Поддерживает безопасный и экономичный темп движения
Комфорт
Датчики дождя и света
Автоматическое включение фар и стеклоочистителей
Комфорт
Сиденье водителя с микролифтом
Тонкая настройка под рост и комплекцию водителя
Комфорт
Центральный замок с пультом управления
Позволяет дистанционно закрыть и открыть автомобиль
Комфорт
Мультимедиа LADA Enjoy Pro
Яндекс. Авто, навигатор, качественный звук
Комфорт
Климатическая система
Создает комфортную температуру в салоне
Комфорт
Обогрев ветрового стекла
Простое нажатие кнопки заменяет 10 минут ручной очистки обледенелого стекла
ОСНОВА БЕЗОПАСНОСТИ
Автомобиль с хорошей обзорностью и управляемостью по-настоящему раскрывает способности водителя. Помогает ориентироваться на дороге, быстро и эффективно реагировать. И всегда держит наготове невидимые средства защиты: АБС с усилителем экстренного торможения, подушки безопасности, ремни с преднатяжителями, систему оповещения «ЭРА-ГЛОНАСС». Проверять и испытывать их необязательно, но знать о них — нужно.
Система торможения ABS+BAS
Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
Две фронтальные подушки безопасности — безопасность
Система помощи при трогании на подъеме (HSA)
Задние датчики парковки
Экстерьер
НОВОЕ ПРОЧТЕНИЕ КЛАССИКИ
Современный, рациональный, комфортный. Седан со вместительным багажником, который гармонично вписан в стремительную форму кузова. Как тот самый костюм, который подходит к любой фигуре. Как фильм, который видели все: всегда интересный и по-новому актуальный.
15» легкосплавные оригинальные диски
Контрастный стиль и выразительная форма спиц
Большие зеркала
Гарантируют отличную обзорность
Оптика
Эффективны ночью, эффектны днем
Интерьер
УЮТ ДЛЯ КАЖДОГО
О чем мечтает водитель? Сесть за руль и почувствовать,что автомобиль как будто создан специально для него. Чего ждет пассажир? Удобно устроиться в мягком кресле и расслабиться, глядя в окно. Просторный салон, практичные обивки. Мультимедиа с качественным звуком и информативным экраном. Эффективный кондиционер и прекрасная обзорность. Из множества этих деталей складывается комфорт для каждого как в короткой поездке, так и в длительном путешествии.
Автоматическая трансмиссия
Настроена на комфорт и динамику
Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
Безопасность под контролем
Комфорт
КОМФОРТ БЕЗ КОМПРОМИССОВ
Привычно,понятно и эргономично — в этом автомобиле чувствуешь себя как дома. Фамильная черта LADA Granta — мягкие, удобные передние сиденья с широким диапазоном продольной регулировки: такой салон с готовностью примет человека любого роста. Каждая кнопка и рукоятка — на своем месте, и все настроено на комфорт и практичность — от хорошо читаемой подсветки приборов до эффективного пакета шумоизоляции. От селектора коробки передач до кнопки открывания багажника.
Электропривод
Обогреваемые наружные зеркала оснащаются электроприводом
Круиз-контроль
Поддерживает безопасный и экономичный темп движения
Датчики дождя и света
Автоматическое включение фар и стеклоочистителей
Сиденье водителя с микролифтом
Тонкая настройка под рост и комплекцию водителя
Центральный замок с пультом управления
Позволяет дистанционно закрыть и открыть автомобиль
Мультимедиа LADA Enjoy Pro
Яндекс.Авто, навигатор, качественный звук
Климатическая система
Создает комфортную температуру в салоне
Обогрев ветрового стекла
Простое нажатие кнопки заменяет 10 минут ручной очистки обледенелого стекла
Безопасность
ОСНОВА БЕЗОПАСНОСТИ
Автомобиль с хорошей обзорностью и управляемостью по-настоящему раскрывает способности водителя. Помогает ориентироваться на дороге, быстро и эффективно реагировать. И всегда держит наготове невидимые средства защиты: АБС с усилителем экстренного торможения, подушки безопасности, ремни с преднатяжителями, систему оповещения «ЭРА-ГЛОНАСС». Проверять и испытывать их необязательно, но знать о них — нужно.
Система торможения ABS+BAS
Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
Две фронтальные подушки безопасности — безопасность
Система помощи при трогании на подъеме (HSA)
Задние датчики парковки
ВЫБЕРИ СВОЙ АВТОМОБИЛЬ
{{engineType.engine.name}}
{{transmissionType}}
{{models[0].engine.name}}
{{selectedComplect[0].name}}
{{complect.name}}
- {{text.key}}
от {{thousandSeparator(selectedModel.price ? selectedModel.price : ‘ ‘)}} ₸
от {{thousandSeparator(selectedModel.monthlyPrice ? selectedModel.monthlyPrice : ‘ ‘)}} ₸ / мес
{{selectedModel.tradeInPrice ? ‘- ‘ + thousandSeparator(selectedModel.tradeInPrice) + ‘ ₸ в Trade-In’ : »}}
{{selectedModel.specialName ? selectedModel.specialName: »}}
КОНФИГУРИРОВАТЬ {{inCompare ? ‘Убрать с СРАВНЕНИЕ’: ‘ДОБАВИТЬ В СРАВНЕНИЕ’ }} {{familyCode}} с пробегом
Цветовая Гамма
КРАСНЫЙ «СЕРДОЛИК» МЕТАЛЛИК
Доплата: 30000 ₸
МОЩНОСТЬ, СКОРОСТЬ ИЛИ КОМФОРТ?
Все вместе! А еще — экономичность, простота и надежность современных моторов LADA. Раскрыть характер автомобиля помогают разные варианты трансмиссии. «Автомат» — эталон плавного хода, а «механика» — надежная и экономичная.
1.6 л 8-кл. (90 л.с.)
Мощность
90 л. с. (66 кВт) при 5000 об/минРабочий объем
1596 смКрутящий момент
143 Нм при 3800 об/минНормы токсичности
ЕВРО-51.6 л (106 л.с.)
Мощность
106 л.с. (78 кВт) при 5800 об/минРабочий объем
1596 смКрутящий момент
148 Нм при 4200 об/минНормы токсичности
ЕВРО-51.6 л (98 л.с.)
Мощность
98 л.с. (72 кВт) при 5600 об/минРабочий объем
1596 смКрутящий момент
145 Нм при 4000 об/минНормы токсичности
ЕВРО-5ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
1.6 л 8-кл. (90 л.с.), механика
1.6 л (106 л.с.), механика
1.6 л (98 л.с.), автомат
Данные по расходу топлива определены в стандартизованных условиях с применением специального измерительного оборудования, в соответствии с требованиями ГОСТ Р41. 101–99 (Правила ЕЭК ООН № 101). Служат для сравнения автомобилей различных автопроизводителей. Эксплуатационной нормой не являются.
СКАЧАТЬ ВСЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ В PDFПРЕДВАРИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВАШЕГО АВТОМОБИЛЯ В ТРЕЙД-ИН
Получите предварительную расчётную стоимость вашего автомобиля с пробегом при условии его обмена на новую LADA в официальном дилерском центре*
ОЦЕНИТЬ СВОЙ АВТОМОБИЛЬ * Результат оценки является приблизительным, носит информационный характер и не является публичной офертой.
ЗАЯВКА НА ТЕСТ-ДРАЙВ
ПРАКТИЧНОСТЬ И КОМФОРТ
Опрятный и ухоженный автомобиль, в котором всегда уверен и которым приятно пользоваться. Для того, чтобы ваша LADA была именно такой, мы уже включили в состав аксессуары:
- набор ковров салона и багажника
- амортизаторы капота
- дефлекторы дверей
- защитная сетка радиатора
Granta лифтбек
Granta лифтбек
запрос дилеру Конфигуратор ОЦЕНКА TRADE-IN Сравнение комплектациймарка: {{selectedBrand ? selectedBrand. name : »}}
{{brand.name}}
{{brand.name}}
{{onlyPopularBrands ? ‘все’ : ‘популярные’}} марки
модель: {{selectedModel ? selectedModel.name : »}}
{{model.name}}
{{model.name}}
{{onlyPopularModels ? ‘все’ : ‘популярные’}} модели
год:
{{selectedYear ? selectedYear : ‘Выберите год выпуска’}}
кузов: {{selectedBody ? selectedBody : »}}
{{body}}
поколение: {{selectedGeneration ? selectedGeneration.name : »}}
{{gen.name}}
Модификация: {{selectedModification ? selectedModification.name : »}}
{{mod. name}}
город: {{selectedCity ? selectedCity.name : »}} {{city.name}}
пробег:
{{ thousandSeparator(mlResult.min_price) }} ₸
{{ thousandSeparator(mlResult.avg_math_for_trade) }} ₸
{{ thousandSeparator(mlResult.end_point) }} ₸
дилерский центр
номер телефона
желаемая дата
Документы для физ.лица Документы для юр.лица
- 1. Удостоверение личности
- 2. Техпаспорт
- 3. Справка об отсутствии задолженности
- 4. Нотариально заверенное согласие супруга на совершение сделки
- 1. Реквизиты организации
- 2. Техпаспорт автомобиля
- 3. Удостоверение личности первого Руководителя организации
- 4. Приказ о назначении первого Руководителя организации
- 5. Устав или доверенность, на основании которого действует первый Руководитель организации
- 6. Приказ на продажу автомобиля в 2-х экземплярах
- 7. Справка о регистрации (перерегистрации) юридического лица
- 8. Доверенность на имя лица, кто будет оформлять сделку по продаже автомобиля
Заполните все поля
Объем багажника лада гранта 2018: седан, лифтбек и универсал
К бюджетным автомобилям особенно отечественного производства много требований не предъявляют. Водителям главное доехать из одного пункта в другой, разместить всю семью с относительным комфортом и загрузить нужные вещи.
Появление технологий вроде онлайн сервисов для заработка на своем личном транспорте позволило многим подзаработать, что создает необходимость в перевозке еще большего количества вещей.
Рассмотрим багажник Лады Гранты на практичность в 2018 году: седан, лифтбек, универсал.
Багажник Лады Гранты седан
Седан оборудован достаточно вместительным багажником. Стандартно водитель получает около 520 литров. Нельзя категорично говорить про недостаток такого объема. Учитывая ценовую категорию автомобиля, объем багажника соответствует ему.
При желании в 520 литров поместиться любая дорожная сумка, рыболовные снасти, мешки с овощами и многое другое. Многие автомобилисты специально присматриваются к Ладе Гранте из-за ее шикарного по их представлению багажника.
Основные параметры объема 520 л:
- длина: 103 см;
- ширина: от 94 до 132 см;
- высота: около 50 см.
Есть сведения, что в багажнике седана Лады Гранта помещается до 6-ти стандартных мешков картошки. Дачники точно с такой загрузкой вздохнут с облегчением. Городским жителям подавно хватит стандартного объема, если нет, тогда всегда можно разложить спинки сидений и получить свои 815 литров.
При смене шин на зимние водители указывают, что R16 спокойно помещаются в багажнике и салоне по паре шин. С R17 уже будут возникать трудность. Тут необходимо уже перевозить на прицепе или воспользоваться более вместительным автомобилем.
Читайте также
Новая Лада Гранта Кросс универсал: фото цены характеристики
Несколько ранее АвтоВАЗ раскрыл новую Гранту не дожидаясь Московского автосалона. Востребованное семейство…
Багажник Лады Гранты лифтбек
Лифтбек показывает скромнее результаты. В обычном состоянии багажник покажет 440 литров. Речь идет больше о городском виде транспорта. Городским жителям достаточно пространства для всех повседневных дел: уложить сумки из магазина, детскую коляску, некоторые товары из хозяйственного магазина. Среднестатистическому семьянину лифтбека хватит с головой.
Для перевозки бытовой техники LADA Granta в такой модели также пригодится. Раскладывая второй ряд сидений, пространство увеличивается до 760 литров. Холодильники, стиральные, машины и другие товары подобного размера в длину размещаются без проблем.
Характеристики багажника на 760 литров:
- длина: 158 см;
- длина до спинок сидений: 96 см;
- ширина: от 867 до 130 см;
- высота: 52 см.
Нет отзывов о вместительности мешков картошки и других овощей, но при желании пару мешков точно поместится. Лифтбек отмечается удобным со стороны невысокой загрузки и небольшого бортика багажника. Женщинам проще попадать в салон, когда необходимо что-то уложить внутрь.
Читайте также
Технические характеристики нового лифтбека Лада Гранта
Обновленный кузов Лада Гранта 2019 стал не единственным приятным изменением. Улучшились и технические характеристики….
Багажник Лады Гранты универсал
Самый маленький багажник в универсале – 355 литров. Трудно говорить про его объем, если речь пойдет о вместительности. Однозначно такая Гранта подходит далеко не всем автомобилистам нашей страны. В городе 355 литров также может не хватать, ведь отправляясь в отпуск поместить весь багаж внутри практически невозможно.
Немного лучше размер при разложенном диване – 670 литров. Хотя для транспортировки места прибавилось, но кроме одного пассажира взять уже никого не получится. Много расписывать про столь небольшой багажник глупо. Каждый водитель понимает, что тут нужно просто наслаждаться ездой, а не выполнять перевозки.
Самым очевидным преимуществом Гранты универсал становится возможность покупки модели с 145 мм клиренса при загрузке: багажник максимально близко к поверхности земли, что упрощает поднятие тяжести. При этом двигатель будет обладать 98 л. с., что далеко не самый плохой результат.
Пятая дверь еще один плюс универсалу. Пока в седане необходимо подстроиться под габариты груза тут достаточно просто открыть широкую дверь багажника и все выгрузить без проблем.
Читайте также
Технические характеристики нового универсала Лада Гранта
Обновленный кузов Лада Гранта 2019 стал не единственным приятным изменением. Улучшились и технические характеристики….
Выводы касательно багажников в LADA Granta
Седан самый универсальный автомобиль на наших дорогах. Такая Лада Гранта способна в полной мере удовлетворить потребности семьи. При необходимости можно поехать по делам на дачу или выполнять заказы, исполняя роль грузового такси.
Лифтбек средний вариант по объему багажника. Тут уже нужно основательно подумать, какие перевозки будут выполняться автомобилем в будущем. Загородным жителям придется подстраиваться под вполне ощутимые ограничения в 760 литров. Хотя в городе места по-прежнему сзади остается предостаточно.
Универсал традиционно городской транспорт для поездок на работу. Небольшая семья или холостой водитель смогут выполнять свои текущие потребности, но для других целей приходится обращаться за помощью в транспортные компании своего города.
«АвтоВАЗ» запатентовал очередные детали для Lada Vesta NG › Usedcars.ru — автомобильный портал
17:12 / ДТП / Орёл
Мотоциклист погиб в ДТП в Орле по вине пьяного автомобилиста
Трагедия произошла 15 сентября около 22. 30 на улице Комсомольской в Орле.
16:55 / ДТП / Петрозаводск
В Петрозаводске сбили 17-летнюю девушку, переходивщую на «красный»
Авария с участием пешехода произошла 15 сентября в 16:45 на перекрестке улиц Калинина и Невского в Петрозаводске.
16:14 / ДТП / Москва
На северо-востоке Москвы автомобиль сбил человека на самокате
Авария произошла утром 16 сентября в районе дома 107 на Ярославском шоссе на северо-востоке Москвы.
15:53 / ДТП / Минеральные Воды
В Минеральных Водах ВАЗ насмерть сбил пешехода
Пешеход погиб в результате наезда автомобиля 15 сентября около 19.30 на улице Кисловодской в Минеральных Водах.
14:38 / ДТП / Сочи
Четыре человека пострадали в ДТП в Сочи
Авария с пострадавшими произошла на трассе «Джубга – Сочи до гр. с Республикой Абхазия» в районе поселка Уч-Дере.
11:08 / ДТП / Уфа
В Уфе автомобиль после ДТП упал с моста – погибли двое
Два человека погибли в результате автомобильной аварии, произошедшей 15 сентября во втором часу ночи на мосту через проспект Салавата Юлаева в Уфе.
10:07 / ДТП / Нурлат
Три человека погибли в ДТП с трактором в Татарстане
Авария с тремя погибшими произошла 15 сентября около 0:24 на автодороге Кузайкино – Нурлат возле села Бурметьево в Нурлатском районе Татарстана.
08:15 / Автоновости / Тольятти / Lada (ВАЗ)
«АвтоВАЗ» прекратил производство Lada Xray
Стало известно о том, что Волжский автозавод не собирается возвращать на конвейер хэтчбек Lada Xray и его вседорожную модификацию Cross.
15.09.2022 / ДТП / Йошкар-Ола
В Йошкар-Оле насмерть сбили пешехода
Пешеход погиб в результате наезда автомобиля 15 сентября у дома 124 по улице Машиностроителей в Йошкар-Оле.
15.09.2022 / ДТП / Элиста
Оба водителя погибли в ДТП в Калмыкии
Авария с двумя погибшими произошла 11 сентября на 151 километре трассы Р-215 «Астрахань-Кизляр-Махачкала» в Калмыкии.
15.09.2022 / ДТП / Омск
В Омске автомобиль сбил женщину
Авария с участием пешехода произошла15 сентября в районе дома № 103 улице Красный Путь в Омске.
15.09.2022 / ДТП / Маркс, Саратов
Две девушки пострадали в ДТП под Марксом
Авария с пострадавшими произошла вчера, 14 сентября, примерно в 13:40 на 312 километре автодороги Саратов – Волгоград в Саратовской области.
15.09.2022 / Автоновости / Калуга, Нижний Новгород / Skoda, Volkswagen
В России может возобновиться сборка автомобилей Volkswagen – правда, под другой маркой
Появилась информация о том, что немецкий концерн Volkswagen Group AG может возобновить сборку своих машин в нашей стране.
15.09.2022 / ДТП / Ржев, Тверь
Пассажир автомобиля пострадал в ДТП в Ржевском районе Тверской области
Авария произошла 14 сентября на 228-м километре трассы «М-9 Балтия» во Ржевском районе Тверской области.
15.09.2022 / ДТП / Новочеркасск, Ростов-на-Дону
В Ростовской области водитель насмерть сбил женщину и скрылся
Пожилая женщина погибла в результате наезда автомобиля вечером 14 сентября около дома № 72 по улице Восточная в поселке Каменоломни в Октябрьском районе Ростовской области.
15.09.2022 / ДТП / Мексика
Семь человек погибли в массовом ДТП в Мексике
Страшная авария произошла на 108-м километре участка дороги Таретан — Санта-Касильда в мексиканском штате Мичоакан.
Читать всю ленту автоновостей
The Fever and the Fret (2018)
- Cast & crew
- User reviews
IMDbPro
- 20182018
- 1h 16m
IMDb RATING
7. 9/10
65
YOUR RATING
ПОПУЛЯРНОСТЬ
147,751
ДрамаФэнтези
Беспокойная девочка, которую истязают хулиганы, и она входит в измененное состояние.
IMDb RATING
7.9/10
65
YOUR RATING
POPULARITY
147,751
- Director
- Cath Gulick
- Writer
- Cath Gulick
- Stars
- Adelina Amosco
- Айвори Акино
- Кэтлин Чанхо
- Режиссер
- Кэт Гулик
- Сценарист
- Кэт Гулик
- Звезды
- Adelina Amosco
- Ivory Aquino
- Kathleen Changho
- Awards 49
- 40003 40003 40003 40003 40003 40003 40003 40003 40003 40003 40003 40003 40003
- 9000 3 40003
- .
Фото
Лучшие актеры
Аделина Амоско
- Элеонора
Айвори Акино
Кэтлин Чанго
- 9 Гутьеррес Мс.0004
Shirley Cuyugan O’Brien
- Grandma
Vanessa Carmona
Jenny Moon
Rod Rodriquez
Alyssa Abreu
- 2nd School Student
Tatiana Adams
- 2nd School Student
Sally Алонсо
- Судебная прихожанка
Илья Авезбакиев
- Kid at Party
Аманда Бедула
- Ученица 1-й школы
Samantha Biggs
- 1st School Student
Remy Blanco
- Church congregation
Leonila Blaustein
- Grandma’s friend
Joseph Boodoo
- 1st School Student
Karen Brown
- Помощник юриста корпорации
Шани Кира Бакнер
- Ученица 2-й школы
- Директор
- Кэт Гулик
- Писатель
- Cath Gulick
- All Cast & Crew
- Производство, касса и многое другое в IMDBPRO
больше, как эта
Reactown
Старше.
Канун
Край исчезновения
Мотель Introspectum
Берлинская невеста
The Droving
Silent Panic
Astro Loco
Framed
Сюжетная линия
Отзывы пользователей3
Обзор
Популярный обзор
8/
10
Отлично сделано!
Меня сразу поразили уникальные черно-белые изображения с очень творческой и превосходной операторской работой. Хорошо построенный фильм с непреходящим посылом.
полезно•1
0
- MarkAshtonLund
- 25 мая 2021 г.
Подробнее
- Дата выпуска
- 2018 (Соединенные Штаты)
- Страна Происхождения
- Соединенные Штаты
- Официальные сайты
- Официальный Facebook
- 4
9999993- .
- Места съемок
- Нью-Йорк, Нью-Йорк, США
- Продюсерская компания
- Slow Burn
- См. другие кредиты компании на IMDbPro
- Средства выполнения
1 час 16 минут
- Color
- Черно -белый
- 1 Междисциплинарный центр нанотехнологий, Орхусский университет, 8000, Орхус С, Дания.
- 2 Химический факультет Орхусского университета, 8000, Орхус С, Дания.
- 3 Кафедра молекулярной биологии и генетики, Орхусский университет, 8000, Орхус С, Дания.
- 4 Междисциплинарный центр нанотехнологий, Орхусский университет, 8000, Орхус С, Дания. [email protected].
- 5 Кафедра молекулярной биологии и генетики Орхусского университета, 8000, Орхус C, Дания. [email protected].
- PMID: 29295996
- PMCID: PMC5750238
- DOI: 10. 1038/с41467-017-02435-х
- 1 Междисциплинарный центр нанотехнологий, Орхусский университет, 8000, Орхус С, Дания.
- 2 Химический факультет Орхусского университета, 8000, Орхус С, Дания.
- 3 Кафедра молекулярной биологии и генетики, Орхусский университет, 8000, Орхус С, Дания.
- 4 Междисциплинарный центр нанотехнологий, Орхусский университет, 8000, Орхус С, Дания. [email protected].
- 5 Кафедра молекулярной биологии и генетики Орхусского университета, 8000, Орхус C, Дания. [email protected].
- PMID: 29295996
- PMCID: PMC5750238
- DOI: 10. 1038/с41467-017-02435-х
Флуорогенные аптамеры устраняют гибкость соединений РНК, используя FRET, зависящий от ориентации.
Jeng SCY, Trachman RJ 3rd, Weissenboeck F, Truong L, Link KA, Jepsen MDE, Knutson JR, Andersen ES, Ferré-D’Amaré AR, Unrau PJ. Jeng SCY и др. РНК. 2021 апр; 27 (4): 433-444. doi: 10.1261/РНК.078220.120. Epub 2020 29 декабря. РНК. 2021. PMID: 33376189 Бесплатная статья ЧВК.
Новый метод скрининга конкурентоспособных FRET-аптамеров, примененный к разработке анализа E. coli.
Бруно Дж.Г., Каррильо М.П., Филлипс Т., Эндрюс С.Дж. Бруно Дж. Г. и соавт. J Флуоресц. 2010 ноябрь;20(6):1211-23. doi: 10.1007/s10895-010-0670-9. Epub 2010 5 мая. J Флуоресц. 2010. PMID: 20443050
Управляемая структурой инженерия гомодимерного аптамера, включающего флуоресценцию манго-IV, дает пару РНК FRET.
Трахман Р.Дж. 3-й, Кожокару Р., Ву Д., Пищек Г., Рикелинк М., Унрау П.Дж., Ферре-Д’Амаре А.Р. Trachman RJ 3rd, et al. Структура. 2020 7 июля; 28(7):776-785.e3. doi: 10.1016/j.str.2020.04.007. Epub 2020 7 мая. Структура. 2020. PMID: 32386573 Бесплатная статья ЧВК.
FRET-анализ РНК-белковых взаимодействий с использованием аптамеров шпината.
Герхард Л., Хенниг С. Герхард Л. и др. Методы Мол Биол. 2021;2323:171-197. дои: 10.1007/978-1-0716-1499-0_13. Методы Мол Биол. 2021. PMID: 34086281
Показания флуоресцентного переноса энергии биосенсора на основе аптазима.
Руэда Д., Уолтер Н.Г. Руэда Д. и соавт. Методы Мол Биол. 2006;335:289-310. doi: 10.1385/1-59745-069-3:289. Методы Мол Биол. 2006. PMID: 16785635 Обзор.
Использование каркасов РНК-оригами в Saccharomyces cerevisiae для dCas9-опосредованного контроля транскрипции.
Потулакис Г., Нгуен МТА, Андерсен Э.С. Потулакис Г. и соавт. Нуклеиновые Кислоты Res. 2022 8 июля; 50 (12): 7176-7187. дои: 10. 1093/нар/gkac470. Нуклеиновые Кислоты Res. 2022. PMID: 35648481 Бесплатная статья ЧВК.
Синтетическая трансляционная регуляция с помощью каркасов оригами, связывающих белок РНК.
Нгуен МТА, Потулакис Г., Андерсен Э.С. Нгуен МТА и др. ACS Synth Biol. 2022 20 мая; 11(5):1710-1718. doi: 10.1021/acssynbio.1c00608. Epub 2022 19 апр. ACS Synth Biol. 2022. PMID: 35438978 Бесплатная статья ЧВК.
Включение пары FRET в РНК рибопереключателя для измерения концентрации Mg 2+ и изменения конформации РНК в клетке.
Сюэ Ю, Лю Ю. Сюэ Ю и др. Int J Mol Sci. 2022 27 января; 23 (3): 1493. дои: 10.3390/ijms23031493. Int J Mol Sci. 2022. PMID: 35163416 Бесплатная статья ЧВК.
Разработка синтетических РНК-устройств для клеточного контроля.
Дыкстра ПБ, Каплан М, Смольке КД. Дайкстра П.Б. и др. Нат Рев Жене. 2022 апр; 23(4):215-228. doi: 10.1038/s41576-021-00436-7. Epub 2022 4 января. Нат Рев Жене. 2022. PMID: 34983970 Обзор.
Большой стоксов сдвиг активации флуоресценции в РНК-аптамере за счет межмолекулярного переноса протона на гуанин.
Мечковски М., Штайнметцгер С., Бесси И., Ленц А.К., Шмидель А., Хольцапфель М., Ламберт С., Пена В., Хёбартнер С. Мечковский М. и соавт. Нац коммун. 2021 10 июня; 12 (1): 3549. doi: 10.1038/s41467-021-23932-0. Нац коммун. 2021. PMID: 34112799 Бесплатная статья ЧВК.
- Чалфи М., Ту Ю. , Ойскирхен Г., Уорд В.В., Прашер Д.К. Зеленый флуоресцентный белок как маркер экспрессии генов. Наука. 1994; 263:802–805. doi: 10.1126/science.8303295. — DOI — пабмед
- Цзянь РИ. Зеленый флуоресцентный белок. Анну. Преподобный Биохим. 1998; 67: 509–544. doi: 10.1146/annurev.biochem.67.1.509. — DOI — пабмед
- Уэлле Дж. , Шорр С., Икбал А., Уилсон Т.Дж., Лилли Д.М. Ориентация цианиновых флуорофоров, терминально прикрепленных к ДНК с помощью длинных гибких нитей. Биофиз. Дж. 2011; 101:1148–1154. doi: 10.1016/j.bpj.2011.07.007. — DOI — ЧВК — пабмед
- Бабендур Дж.Р., Адамс С.Р., Циен Р.Ю. Аптамеры включают флуоресценцию трифенилметановых красителей. Варенье. хим. соц. 2003; 125:14716–14717. дои: 10.1021/ja037994o. — DOI — пабмед
- Краус Г. А. и соавт. Фторированные аналоги малахитового зеленого: синтез и токсичность. Молекулы. 2008; 13: 986–994. doi: 10.3390/молекулы 13040986. — DOI — ЧВК — пабмед
- 683305/Европейский исследовательский совет/Международный
- Исследования
- Открытый доступ
- Опубликовано:
- Чонджин Ли 1 ,
- Санджун Парк 1 и
- Сунгчул Хон ORCID: orcid.org/0000-0002-7131-2138 1,2
2564 доступа
11 цитирований
5 Альтметрический
Сведения о показателях
- AF488:
Алекса Флуор 488
- КРАСКА:
Накопление точек для визуализации в наноразмерной топографии
- Серийный номер:
Отношение сигнал/шум
Hell SW, Kroug M. Флуоресцентная микроскопия с истощением основного состояния: концепция преодоления предела дифракционного разрешения. Лазеры Appl Phys B Opt. 1995; 60: 495–7.
Артикул Google ученый
Густафссон МГЛ. Превышение предела бокового разрешения в два раза с помощью микроскопии со структурированным освещением. Дж Микроск. 2000;198:82–7.
КАС Статья Google ученый
Густафссон МГЛ. Нелинейная микроскопия со структурированным освещением: широкопольная флуоресцентная визуализация с теоретически неограниченным разрешением. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005; 102:13081–6.
КАС Статья Google ученый
Бетциг Э., Паттерсон Г.Х., Суграт Р., Линдвассер О.В., Оленыч С., Бонифачино Дж.С., Дэвидсон М.В., Липпинкотт-Шварц Дж., Хесс Х.Ф. Визуализация внутриклеточных флуоресцентных белков с нанометровым разрешением. Наука. 2006; 313:1642–5.
КАС Статья Google ученый
Hess ST, Girirajan TPK, Mason MD. Визуализация сверхвысокого разрешения с помощью флуоресцентной микроскопии локализации фотоактивации. Биофиз Дж. 2006; 91: 4258–72.
КАС Статья Google ученый
Раст М.Дж., Бейтс М., Чжуан X. Визуализация субдифракционного предела с помощью стохастической оптической реконструкционной микроскопии (STORM). Нат Методы. 2006;3:793–6.
КАС Статья Google ученый
«>Юнгманн Р., Штайнхауэр К., Шейбле М., Кузык А., Тиннефельд П., Зиммель Ф.С. Кинетика одиночных молекул и микроскопия сверхвысокого разрешения с помощью флуоресцентной визуализации временного связывания ДНК-оригами. Нано Летт. 2010;10:4756–61.
КАС Статья Google ученый
Lee J, Park S, Kang W, Hohng S. Ускоренное получение изображений сверхвысокого разрешения с помощью FRET-PAINT. Мол Мозг. 2017;10:63.
Артикул Google ученый
Auer A, Strauss MT, Schlichthaerle T, Jungmann R. Быстрая визуализация ДНК-PAINT без фона с использованием зондов на основе FRET. Нано Летт. 2017;17:6428–34.
КАС Статья Google ученый
Средство просмотра спектров. https://www.thermofisher.com/order/spectra-viewer. По состоянию на 2 октября 2017 г.
Спектры поглощения. http://www.atto-tec.com/index.php?id=256&no_cache=1&L=1. По состоянию на 2 октября 2017 г.
Спектры излучения. http://www.atto-tec.com/index.php?id=258&no_cache=1&L=1. По состоянию на 2 октября 2017 г.
Нормализованные данные по поглощению и излучению. https://biotium.com/wp-content/uploads/2016/03/CF-Dyes-Absorbtion-and-Emission-Normalized-Data-web.xls. По состоянию на 2 октября 2017 г.
Бантерле Н., Буй К.Х., Лемке Э.А., Бек М. Кольцевая корреляция Фурье как критерий разрешения для микроскопии сверхвысокого разрешения. J Struct Biol. 2013; 183:363–7.
КАС Статья Google ученый
«>Jones SA, Shim SH, He J, Zhuang X. Быстрая трехмерная визуализация живых клеток со сверхвысоким разрешением. Нат Методы. 2011; 8: 499–508.
КАС Статья Google ученый
Шрофф Х., Гэлбрейт К.Г., Гэлбрейт Дж.А., Бетциг Э. Микроскопия фотоактивированной локализации живых клеток динамики наноразмерной адгезии. Нат Методы. 2008; 5: 417–23.
КАС Статья Google ученый
Endesfelder U, Malkusch S, Fricke F, Heilemann M. Простой метод оценки средней точности локализации в эксперименте по микроскопии локализации одной молекулы. Гистохим клеточной биологии. 2014; 141:629–38.
КАС Статья Google ученый
Lee J, Miyanaga Y, Ueda M, Hohng S. Видеоконфокальная микроскопия для визуализации отдельных молекул в живых клетках и флуоресцентная визуализация сверхразрешения. Биофиз Дж. 2012; 103:1691–7.
КАС Статья Google ученый
Park S, Kang W, Kwon YD, Shim J, Kim S, Kaang BK, Hohng S. Флуоресцентная микроскопия сверхвысокого разрешения для трехмерной реконструкции толстых образцов. Мол. Мозг. 2018;11:17.
Артикул Google ученый
Овесны М., Кржижек П., Борковец Ю., Швиндрих З., Хаген Г.М. ThunderSTORM: комплексный подключаемый модуль ImageJ для анализа данных PALM и STORM и получения изображений сверхвысокого разрешения. Биоинформатика. 2014;30:2389–90.
Артикул Google ученый
Department of Physics and Astronomy, Seoul National University, Seoul, 08826, Republic of Korea
Jongjin Lee, Sangjun Park & Sungchul Hohng
Institute of Applied Physics, Seoul National University, Seoul, 08826, Республика Корея
Sungchul Hohng
- Jongjin Lee
Посмотреть публикации авторов
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Sangjun Park
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Sungchul Hohng
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Успехи: Мы живем в золотой век прогресса в области искусственного интеллекта. Пора начать серьезно относиться к его потенциалу и рискам, пишет наш обозреватель технологий.
- Создание «мыслительного партнера» : А.И. системы могут обрабатывать огромные объемы данных за считанные секунды, но они не могут понять мир. Один человек хочет изменить это.
- Фотонаблюдение: У Google есть автоматизированный инструмент для обнаружения оскорбительных изображений детей. Но система может ошибиться, и последствия будут серьезными.
- Эти люди настоящие?: Мы создали нашу собственную систему искусственных технологий, чтобы понять, насколько легко компьютеру создавать поддельные лица.
- 99993
- 4999993
- 994. 9004.
- 994. также известен
- 9993
- 444
Технические спецификации
Связанные новости
Внесение в эту страницу
Предложите EDIT OR ADIT
.
Под каким названием The Fever and the Fret (2018) был официально выпущен в Канаде на английском языке?
Ответить
Еще для изучения
Недавно просмотренные
У вас нет недавно просмотренных страниц
NAMM Обновление 2018! LSL Instruments выпускает 24-ладовый XT4DX! – Unleavened Shred
2017 год был самым загруженным за всю нашу жизнь по изготовлению гитар на заказ. То, что началось как новое приключение с новой компанией, помогающей развивать бренд, используя наш текущий арсенал одних из лучших винтажных сборок на планете, превратилось во что-то совершенно другое, и я люблю каждую минуту этого! Вы хорошо знаете, что я занимаюсь изготовлением гитар на заказ с 19 лет.99, работая всем, от менеджера вашего местного гитарного магазина, до наблюдения за этим Best Buy / Guitar Center, который шел так хорошо, до продаж в выставочном зале в Carvin Guitars, а затем до 6 лет в качестве менеджера по сборке и продаже нестандартных гитар в Suhr Guitars. Это дает мне твердые 18 лет в этой отрасли. За это время я лично заказал тысячи гитар как для дилеров, так и для покупателей, которые имеют склонность к лучшим вещам в жизни, когда дело доходит до их гитар. Они знают, чего хотят, и по-другому не могут.
За все годы работы с элитными дилерами и элитными клиентами, помогая проектировать один за другим, каждый со своими уникальными характеристиками, я понял, что никто не знает всего. Но знание того, что вы знаете, — это то, с чем нужно считаться. Я узнавал что-то новое почти о каждой сборке, частью которой мне посчастливилось стать. У каждого клиента появится идея, которая заставит вас повернуть голову и сказать «а почему я до этого не додумался»? Каждая новая сборка сопряжена с новыми проблемами конструкции, новыми звуковыми решениями и довольно часто новыми ощущениями, хотя общая форма корпуса очень похожа на многие из тех, что вы держали в руках раньше. Всегда есть что-то, что отличает хорошую гитару от стада. И это уникальное прикосновение исходит от вас. Ваш разум. Ваше творчество. Ваш опыт после многих лет, а не десятилетий тонального паломничества! С большим уважением к этой преданности мы с гордостью представляем новый XT4DX 24 Fret!
В 2017 году многие поклонники марки обвинили нас в том, что мы бросили корабль. Это понятно, поскольку с самого начала мы производили только лучшие винтажные гитары, которые могли собирать год за годом. Мы очень благодарны всем нашим преданным поклонникам, у которых есть от 4 до 5 собственных сборок. Когда я впервые присоединился к компании, первый вопрос, который мне задали, был: «Что бы вы сделали по-другому, чтобы развивать компанию»? Мой ответ был непростым. «Потеряйте защиту от выбора… наденьте причудливую шапку, дайте людям то, что они хотят, и выслушайте их просьбы, прежде чем отказывать им в желаемых вариантах, и смотрите, как они улетают с полки!» Теперь любой, кто когда-либо работал в кастомном магазине, или крупный музыкальный магазин, или бутик розничной торговли знает, что это не так просто. Вы не можете угодить всем людям все время, особенно когда вы говорите о бутик-гитаре. При разработке 24-го лада XT4DX мы намеревались принять и понять, что наши клиенты просили в течение 2017 года, когда он появился. к более современной гитаре. Мы сделали все возможное, чтобы удовлетворить все запросы, которые мы получили в 2017 году, и мы сделали все возможное, чтобы получить лучший Tonewood для этой новой модели на этом NAMM SHOW 2018!
Проблема №1: Мне нужно больше ладов! Нас очень устраивал простой, но элегантный дизайн XT3DX, однако наши клиенты постоянно запрашивали версию SuperSat с 24 ладами, которую можно измельчить. В 2017 году мы знали, что в 2018 году нам лучше показать нашим постоянным клиентам, что мы услышали их предложения и приняли их близко к сердцу. Честно говоря, с самого первого дня у нас не было нужды ни в чем, кроме грифа в форме буквы C. Мы сделали традиционные сборки с традиционными формами грифа, поэтому, когда мы выпустили XT3DX, мы предложили его с профилем грифа Slim C, чтобы обеспечить более быструю игру. В сочетании с атласной отделкой это может быть смертельной комбинацией!!! На новом XT4DX мы сделали доступным профиль грифа Modern D! Он начинается примерно с 0,830 на первом ладу и поднимается примерно до 0,880 на 12-м. Хотя мы могли бы сделать еще тоньше, мы решили, что ощущение было вполне комфортным, и обнаружили, что несколько тысяч дюймов имеют существенное значение в стабильности, резонансе, сустейне и общем тоне, поэтому 0,830 были оптимальным вариантом! Примечание: новая форма Modern D теперь доступна для всех наших моделей. Проблема №3: Мне нужен более плоский радиус накладки грифа В прошлом у нас также не было необходимости в очень плоском радиусе накладки грифа. Самое плоское, что мы выбрали, было 12 дюймов, которое было замечено на моделях Topanga и XT. Кроме этого, мы работали с очень традиционными характеристиками, такими как 7,25″, 9,5″ и 12″… В моем прошлом опыте работы с заказными клиентами я никогда не видел более востребованного радиуса, чем старые верные 16″!!! У нас была возможность выбрать 14″, что также удобно, но это было так близко к нашим 12″, что были раньше, мы просто хотели дать вам более существенную разницу между предыдущей моделью и новой 24-дюймовой. Этот гриф быстрый!! Примечание. Радиус 16 дюймов доступен исключительно на XT4DX. XT3DX поставляется исключительно с радиусом 12 дюймов. Проблема №4: Мне нужны большие лады из нержавеющей стали! Это было легко!! Любой, кто играет на современной шред-машине, хочет лады Jumbo из нержавеющей стали… это просто правда, и мы рады ее удовлетворить! Лады Jumbo из нержавеющей стали входят в стандартную комплектацию XT4DX! Проблема №5: Я хочу как вариант, как современные контуры, так и традиционный откидной верх! Это вызвало жаркие споры и вызвало много споров среди наших друзей и поклонников, поэтому мы хотели бы сообщить массам, что мы рады предоставить любой вариант! Мы знаем, что новый современный контур может стать серьезным изменением для наших преданных поклонников. Мне лично нравится! Он чрезвычайно удобен и выглядит так красиво и агрессивно, что это действительно то, что вам нравится!! Так что независимо от того, что ваш вкус диктует ваша следующая сборка, мы хотели бы думать, что у нас есть все!
Мы с нетерпением ждем возможности рассказать вам больше об этой новой модели! Мы также были бы рады, если бы вы посетили нас на нашем стенде на NAMM 2018 и попробовали его сами! Мы обещаем вернуться после выставки с полным обзором нового XT4DX во всей его красе!!
Нравится:
Нравится Загрузка. ..
Я являюсь директором по продажам здесь, в LSL Instruments, и занимаюсь бизнесом MI/Custom Guitar с 1999 года. Давным-давно потерял счет тому, в скольких нестандартных инструментах я принимал участие, но я по-прежнему увлечен тем, что я делаю и люблю помогать другим создавать уникальные и индивидуальные инструменты! Это сердце UNLEAVENED SHRED! Посмотреть все сообщения пользователя unleavenedshred
Разработка генетически кодируемой системы FRET с использованием флуоресцентных аптамеров РНК
. 2018 2 января; 9 (1): 18.
doi: 10.1038/s41467-017-02435-x.
Метте Д. Э. Джепсен 1 , Штеффен М. Спарват 1 , Торбьорн Б. Нильсен 1 2 , Ане Х Лангвад 1 3 , Гвидо Гросси 1 , Курт В Готхельф 1 2 , Эббе С Андерсен 4 5
Принадлежности
Бесплатная статья ЧВК
Метте Д.Э. Джепсен и соавт. Нац коммун. .
Бесплатная статья ЧВК
. 2018 2 января; 9 (1): 18.
doi: 10.1038/s41467-017-02435-x.
Авторы
Метте Д. Э. Джепсен 1 , Штеффен М. Спарват 1 , Торбьорн Б. Нильсен 1 2 , Ане Х Лангвад 1 3 , Гвидо Гросси 1 , Курт В Готхельф 1 2 , Эббе С Андерсен 4 5
Принадлежности
Абстрактный
Флуоресцентные РНК-аптамеры полезны в качестве маркеров для отслеживания молекул РНК внутри клеток и для создания биосенсорных устройств. Резонансный перенос энергии Ферстера (FRET) на основе флуоресцентных белков использовался для обнаружения конформационных изменений, однако такие устройства FRET еще не были созданы с использованием флуоресцентных РНК-аптамеров. Здесь мы разрабатываем систему FRET (apta-FRET) на основе РНК-аптамера с использованием каркасов одноцепочечной РНК-оригами. Для получения FRET флуоресцентные аптамеры шпината и манго помещают в непосредственной близости на каркасы РНК и синтезируют новый флуорофор для увеличения спектрального перекрытия. Разработаны РНК-устройства, которые реагируют на конформационные изменения, и, наконец, конструкции apta-FRET экспрессируются в E. coli, где наблюдается FRET, демонстрируя, что система apta-FRET кодируется генетически и что наноструктуры РНК правильно складываются в бактериях. Мы ожидаем, что система РНК apta-FRET может найти применение в качестве логометрических датчиков для исследований в реальном времени в клеточной и синтетической биологии.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.
Цифры
Рис. 1
FRET между флуоресцентными аптамерами на…
Рис. 1
FRET между флуоресцентными аптамерами на каркасах РНК-оригами. а Структурная схема…
рисунок 1FRET между флуоресцентными аптамерами на каркасах РНК-оригами. a Структурная схема минимального ядра аптамера шпината , (зеленый). Указан сайт связывания DFHBI-1T. Линии со стрелками обозначают связность цепи, а символы Леонтиса-Вестхофа обозначают неканонические пары оснований. b Структурная схема минимального ядра аптамера Mango (оранжевый). Указан сайт связывания ТО1-биотина. c Химическая структура YO3-биотина. d Спектры возбуждения и испускания DFHBI-1T и YO3-биотина в конструкциях шпината и манго соответственно. Серым цветом отмечено спектральное перекрытие между спектром излучения DFHBI-1T и спектром возбуждения YO3-биотина. e 2D-диаграмма и 3D-модель конструкции FRET (apta-FRET) на основе аптамера, показывающая петлю поцелуев (синий), шпинат (зеленый) и манго (оранжевый). Длина стебля между кроссовером конструкции и шпинатом (S) и манго (M) составляет 5 bps (и поэтому называется «S * 5-M5», см. текст и рис. 2 для дальнейшего описания номенклатуры). 3D-модель показана в мультяшном виде, а флуорофоры показаны в заполненном пространстве. f Спектры флуоресценции конструкций apta-FRET после возбуждения DFHBI-1T. Сплошная линия — конструкция S*5-M5, пунктирная линия — конструкция S*5-M5, разработанная без петли поцелуя (KL), а пунктирная линия — конструкция S(-31)-M30, предназначенная для нет ЛАД. На вставке показаны рассчитанные результаты FRET трех конструкций. Столбики погрешностей показывают стандартные отклонения, рассчитанные с использованием трехкратных измерений
Рис. 2
Влияние на FRET диполя…
Рис. 2
Влияние на FRET ориентации дипольного момента и расстояния между шпинатом и манго.…
Рис. 2Влияние на FRET ориентации дипольного момента и расстояния между шпинатом и манго. Трехмерная структура конструкции apta-FRET, в которой шпинат помещен в конструкцию в его нормальной ориентации. DFHBI-1T (зеленый) и TO1-биотин (оранжевый) показаны в заполнении пробелами, а рассчитанный дипольный момент DFHBI-1T показан зеленой стрелкой. Поскольку специфическое связывание YO3-биотина в манго неизвестно, дипольный момент не указан. b FRET выход конструкций от S17-M14 до S17-M30 (число после S и M обозначает расстояние в парах оснований между кроссовером и шпинатом и манго соответственно). Также показаны расстояния между DFHBI-1T в шпинате и TO1-биотином в манго, измеренные на 3D-моделях. Красные кружки вокруг некоторых точек расстояния обозначают 3D-модели, в которых аптамер манго стерически сталкивается со стеблем, несущим шпинат. c Трехмерная структура конструкции apta-FRET, в которой шпинат помещен в конструкцию в перевернутой (*) ориентации. d Выход FRET и расстояния между DFHBI1-T и TO1-биотином в конструкциях от S*16-M14 до S*16-M24. Красные круги похожи на b
Рис. 3
Изучение конформационных изменений с помощью…
Рис. 3
Изучение конформационных изменений с помощью системы apta-FRET. a Представление вторичной структуры…
Рис. 3Изучение конформационных изменений с помощью системы apta-FRET. a Представление вторичной структуры конформационного переключателя apta-FRET, содержащего шпинат (зеленый), манго (оранжевый) и KL, удлиненный шпилькой, которая имеет семенную последовательность (красный), которая позволяет цепочке инвазировать KL специфической РНК последовательности (синий). b Измерения FRET с временным разрешением обратимой инвазии конформационного переключателя apta-FRET с удлиненными РНК-захватчиками toehold и их анти-захватчиками. Стрелка, указывающая вниз, обозначает добавление удлиненной РНК захватчика, а стрелки, указывающие вверх, обозначают добавление антизахватчика. c Частично неструктурированный рибопереключатель SAM (голубой) в датчике apta-FRET SAM вызывает низкий уровень сигнала FRET, когда SAM (синий) отсутствует. При связывании SAM мотив рибопереключателя трансформируется в более структурированную конформацию, а среднее расстояние между флуорофорами в шпинате (зеленый) и манго (оранжевый) уменьшается, что приводит к увеличению сигнала FRET. d Кривая доза-реакция датчика apta-FRET SAM с ЕС 50 17 мкМ. Столбики погрешностей указывают на стандартные отклонения ( п = 3)
Рис. 4
Исследования конструкций apta-FRET, выраженных…
Рис. 4
Исследования конструкций apta-FRET, экспрессированных в E. coli . a ЛАД выходы…
Рис. 4Исследования конструкций apta-FRET, экспрессированных в Кишечная палочка . a FRET выводит конструкции S*5-M5, B*5-M5, S(-31)-M30 и 2H-AE. Черные столбцы представляют собой выходные данные FRET, рассчитанные на основе спектрофлуориметрических измерений, серые столбцы рассчитаны на основе измерений проточной цитометрии. Звездочка обозначает выход FRET, который фактически равен нулю (см. Дополнительную таблицу 3). b Анализ отдельных клеток изображений конфокальной микроскопии конструкций S*5-M5 (синий) и S(-31)-M30 (серый). Анализ основан на 10 изображениях каждой конструкции. Сплошная линия представляет собой сумму двух гауссиан, подогнанных к выходам S(-31)-M30 FRET; пунктирная линия представляет собой одиночную гауссовскую диаграмму, подходящую для выходов S*5-M5 FRET. c Конфокальная микроскопия и тепловая карта FRET клеток, экспрессирующих S*5-M5 (вверху) и S(-31)-M30 (внизу). На изображениях тепловой карты FRET справа красные цвета указывают на низкие выходные значения FRET, а желтые цвета указывают на высокие выходные значения FRET. Только бактерии, демонстрирующие флуоресценцию как от DFHBI-1T, так и от YO3-биотина, были отобраны для представления на тепловой карте (см. раздел «Методы» и дополнительный рисунок 10 для получения дополнительной информации о процессе отбора). Шкала баров соответствует 10 мкм
См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC
.Похожие статьи
Посмотреть все похожие статьи
Цитируется
Просмотреть все статьи «Цитируется по»
использованная литература
Типы публикаций
термины MeSH
вещества
Грантовая поддержка
Ускоренная микроскопия FRET-PAINT | Молекулярный мозг
Молекулярный мозг том 11 , номер статьи: 70 (2018) Процитировать эту статью
Abstract
Недавнее развитие микроскопии FRET-PAINT значительно улучшило скорость визуализации DNA-PAINT, ранее описанной флуоресцентной микроскопии со сверхвысоким разрешением без проблемы фотообесцвечивания. Здесь мы пытаемся достичь максимального предела скорости FRET-PAINT, оптимизируя скорость камеры, скорость диссоциации ДНК-зондов и прохождение донорского сигнала в акцепторный канал, а также дополнительно увеличиваем скорость визуализации FRET-PAINT на 8 -складывать. Визуализация микротрубочек COS-7 со сверхвысоким разрешением показывает, что высококачественные изображения с разрешением 40 нм можно получить всего за десятки секунд.
Введение
Для преодоления дифракционного предела оптической микроскопии были разработаны различные типы методов флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения [1,2,3,4,5,6,7]. Однако это достижение было достигнуто за счет снижения скорости визуализации и общего времени наблюдения; с увеличением оптического разрешения скорость визуализации обычно снижается, а проблема фотообесцвечивания флуорофоров усугубляется, что приводит к ограничению общего времени визуализации. Метод DNA-PAINT (Point Accumulation for Imaging in Nanoscale Topography [8]) преодолел проблему фотообесцвечивания за счет использования временного связывания флуоресцентно помеченной короткой нити ДНК (цепь имиджера) с стыковочной нитью ДНК, конъюгированной с молекулами-мишенями [9]. ]. Однако скорость связывания ДНК-зондов заведомо низкая, и в результате DNA-PAINT имеет чрезвычайно низкую скорость визуализации (1–3 кадра в час), что препятствует широкому использованию DNA-PAINT в биологической визуализации. Для решения этой проблемы DNA-PAINT микроскопия FRET-PAINT была независимо введена двумя группами [10, 11]. В этом методе две короткие цепи ДНК, помеченные донором и акцептором, используются в качестве флуоресцентных зондов. Поскольку для локализации одной молекулы используется только акцепторный сигнал, можно использовать более концентрированные ДНК-зонды, что приводит к 30-кратному увеличению скорости визуализации по сравнению с DNA-PAINT [10].
Предельная скорость FRET-PAINT еще не охарактеризована. Скорость визуализации FRET-PAINT зависит от скорости камеры, скорости диссоциации ДНК-зондов и максимальной концентрации ДНК-зондов. В этой статье мы оптимизируем три фактора, чтобы достичь предела скорости визуализации FRET-PAINT, и в результате сообщаем о флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения, которая может получать изображения с разрешением 40 нм за десятки секунд. В этом процессе мы распознали ранее нехарактерное фотоиндуцированное повреждение ДНК-зондов, которое в настоящее время ограничивает как скорость визуализации, так и время наблюдения FRET-PAINT.
Результаты
Ускоренная диссоциация донорных нитей
Схема эксперимента FRET-PAINT и приборная установка кратко представлены на рис. 1а. В предыдущей работе мы использовали EMCCD (iXon Ultra DU-897 U-CS0-#BV, Андор) с максимальной частотой кадров 56 Гц и площадью изображения 512 × 512. Однако из-за медленной диссоциации ДНК-зондов фактическая частота кадров составляла 10 Гц. В этой работе мы заменили EMCCD на sCMOS-камеру (ORCA-Flash 4.0 V2, Hamamatsu) с максимальной частотой кадров 400 Гц при том же размере области изображения. Однако из-за фотоиндуцированного повреждения ДНК-зондов, которое будет объяснено позже более подробно, максимальная используемая частота кадров составляла 200 Гц. Чтобы компенсировать короткое время экспозиции, интенсивность освещения следует увеличивать пропорционально частоте кадров. По той же причине фотоиндуцированного повреждения ДНК мы использовали мощность освещения 1,5 кВт/см 2 , всего в 3,3 раза больше, чем 460 Вт/см 2 , которые использовались в предыдущей работе.
Рис. 1| Ускоренная диссоциация донорных нитей. ( a ) Схема микроскопии FRET-PAINT. Акцептор флуоресцирует только через FRET, и его сигнал регистрируется высокоскоростной sCMOS-камерой. Сигнал донора подавляется полосовым фильтром. ( b ) Цепи ДНК, используемые для экспериментов: стыковочные (черные), донорные (синие) и акцепторные (красные) нити. Длину донорной нити контролировали путем укорочения 5′-конца донорной нити. Акцепторные и донорные флуорофоры помечены в обозначенных позициях. ( c-f ) Время диссоциации донорных цепей длиной 9 nt ( c ), 8 nt ( d ), 7 nt ( e ) и 6 nt ( f ). На левых панелях показаны репрезентативные временные трассы FRET, в которых высокие и низкие состояния FRET соответствуют связанным и несвязанным состояниям соответственно. Правые панели показывают гистограммы времени диссоциации. Времена диссоциации были получены путем подбора гистограмм экспоненциальной функцией затухания: 670 мс (9 нт), 63 мс (8 нт), 4,8 мс (7 нт) и 3,7 мс (6 нт)9.0009
Полноразмерное изображение
Чтобы полностью использовать увеличенную частоту кадров sCMOS-камеры, необходимо также увеличить скорость переключения ДНК-зондов; если диссоциация ДНК-зонда идет медленно, пятна одиночных молекул начинают перекрываться при более низких концентрациях зонда, что ограничивает общую скорость визуализации. Определены времена диссоциации донорных нитей различной длины. Были протестированы четыре разные донорные нити (рис. 1b, синий). На рис. 1c–f показаны репрезентативные временные кривые (слева) и гистограммы времени диссоциации донорных нитей (справа). Полученные времена диссоциации составили 670 мс (9нт), 63 мс (8 нт), 4,8 мс (7 нт) и 3,7 мс (6 нт). Было измерено, что время диссоциации 7- и 6-нуклеотидных донорных нитей короче, чем время экспозиции камеры (5 мс), и его следует считать неточным. Мы выбрали донорные нити из 7 нт для используемой в данной работе частоты кадров 100 или 200 Гц. Ауэр и др. ранее использовали донорные нити из 7 нт [11], но время диссоциации нити было намного больше (88 мс), чем у нас (4,8 мс).
Улучшенное отношение сигнал/шум (SNR)
Фоновый шум, исходящий от плавающих донорных и акцепторных нитей, ограничивает максимальную концентрацию зонда, которую можно использовать. Чтобы уменьшить фоновый шум и, как следствие, увеличить максимальные концентрации зонда для обеспечения разумного отношения сигнал-шум (SNR), мы сначала попробовали разные пары донор-акцептор, отличные от Alexa Fluor 488 (AF488, Invitrogen)-Cy5. (GE Healthcare), использованная в предыдущей работе. С точки зрения фонового шума, чем больше спектральное разделение излучения донора и акцептора, тем лучше SNR. Сопоставлены спектры поглощения и возбуждения красителей Alexa [12], красителей Atto [13, 14], красителей CF [15] и красителей Cy [12]. AF488 и Cy5 соответственно. На рисунке 2а сравниваются спектры возбуждения (пунктирные линии) и эмиссии (сплошные линии) AF488 (черный), CF488A (красный), Cy5 (пурпурный) и CF660R (фиолетовый). Спектры поглощения и испускания CF488A смещены в синюю сторону по сравнению со спектрами AF488, тогда как их коэффициенты экстинкции на пиках одинаковы. С другой стороны, спектр излучения CF660R сдвинут в красную сторону по сравнению с Cy5. В качестве дополнительной меры по улучшению отношения сигнал-шум мы также заменили длиннополосный фильтр 640 нм (зеленая пунктирная линия) полосовым фильтром 700/75 (зеленая сплошная линия). Поскольку у полосового фильтра длина волны отсечки смещена в красную сторону, чем у фильтра длинного пропускания, некоторая часть акцепторного сигнала теряется при замене, но мы ожидали, что уменьшение просачивания донора повысит отношение сигнал/шум на длинной донорной цепи. концентрации. Как и ожидалось, исходя из того, что CF488A имеет больший коэффициент экстинкции, чем AF488, при 473 нм, пара CF488A-Cy5 дала больше фотонов, чем пара AF488-Cy5 при той же мощности возбуждения (рис. 2б). Фоновый шум и, следовательно, отношение сигнал/шум были значительно улучшены за счет использования полосового фильтра вместо длиннополосного. И фоновый шум, и отношение сигнал/шум также были улучшены с парой CF488A-Cy5, чем с парой AF488-Cy5 (рис. 2c, d). Примечательно, что упомянутый выше процесс оптимизации почти полностью устранил просачивание доноров, в результате чего зависимость ОСШ от концентрации доноров была очень слабой (рис. 2г). Вопреки нашим ожиданиям, мы обнаружили, что замена Cy5 на CF660R не улучшила SNR, поскольку CF660R имеет более высокое прямое возбуждение, чем Cy5, на длине волны 473 нм (дополнительный файл 1: рисунок S1). Поскольку CF660R имеет более низкое прямое возбуждение, чем Cy5, при 488 нм, мы ожидаем, что CF660R может обеспечить лучшую производительность, если мы будем использовать лазер возбуждения 488 нм вместо лазера 473 нм в будущей работе. В этой работе мы использовали исключительно пару CF488A-Cy5 при возбуждении 473 нм.
Рис. 2| Улучшенное отношение сигнал/шум (SNR). ( a ) Спектры возбуждения (штриховые линии) и испускания (сплошные линии) донорных (AF488, черный; CF488A, красный) и акцепторных (Cy5, пурпурный; CF660R, фиолетовый) флуорофоров. Вертикальная синяя пунктирная линия указывает длину волны возбуждения 473 нм, вертикальная зеленая пунктирная линия указывает длину волны отсечки длиннополосного фильтра 640 нм, а зеленая сплошная линия указывает кривую пропускания полосового фильтра 700/75 мкм. ( б ) Сигнал акцептора пар AF488-Cy5 (черный) и CF488A-Cy5 (красный) при мощности возбуждения 1,5 кВт/см 2 , зарегистрированный с помощью sCMOS-камеры и полосового фильтра. Сигнал акцептора пары AF488-Cy5 (синий) при мощности возбуждения 460 Вт/см 2 , зарегистрированный камерой EMCCD и длиннополосным фильтром. Сигнал определяется как амплитуда двумерной гауссовой функции каждого пятна одной молекулы. Открытые квадраты обозначают измеренные значения, а сплошные линии обозначают аппроксимированные кривые с функцией Гаусса. Пара CF488A-Cy5 дает более высокую интенсивность. ( c ) Фоновый шум пар AF488-Cy5 (черный) и CF488A-Cy5 (красный) при мощности возбуждения 1,5 кВт/см 2 с камерой sCMOS и полосовым фильтром. Фоновый шум пары AF488-Cy5 (синий) при мощности возбуждения 460 Вт/см 2 с камерой EMCCD и длиннополосным фильтром. Фоновый шум определяется как полуширина гауссовой функции фонового сигнала. Незаштрихованные квадраты обозначают измеренные значения, а сплошные линии обозначают аппроксимированные кривые с квадратным корнем из концентрации донорных нитей. Полосовой фильтр значительно снижает фоновый шум, а пара CF488A-Cy5 дает более низкий фоновый шум, чем пара AF488-Cy5. Горизонтальная зеленая пунктирная линия указывает на фоновый шум без донорных и акцепторных нитей, который в основном вызван аутофлуоресценцией, исходящей от покровного стекла. ( d ) ОСШ пар AF488-Cy5 (черный) и CF488A-Cy5 (красный) при 1,5 кВт/см (синий) при 460 Вт/см 2 мощность возбуждения, зарегистрированная камерой EMCCD и длиннополосным фильтром. SNR определяется как отношение сигнала к фоновому шуму. Незакрашенные квадраты обозначают расчетные значения, а сплошные линии обозначают аппроксимированные кривые с функцией обратного квадратного корня от концентрации донорной нити. Пара CF488A-Cy5 с sCMOS-камерой и полосовым фильтром дает самое высокое отношение сигнал-шум при высокой концентрации донорных цепей
Полноразмерное изображение
Характеристика скорости формирования изображения нового микроскопа
Чтобы охарактеризовать улучшенную скорость формирования изображения нового микроскопа, мы сравнили скорость формирования изображения нового микроскопа FRET-PAINT с предыдущим. В качестве модельной системы визуализировали микротрубочки клеток COS-7. Для нового микроскопа использовались донорные нити длиной 7 нт и мощность возбуждения 1,5 кВт/см 2 , тогда как для старого микроскопа использовались донорные нити 9 нт и мощность возбуждения 460 Вт/см 2 . На рисунке 3а показано изображение со сверхвысоким разрешением, полученное с помощью старого микроскопа с частотой кадров 10 Гц и временем сбора данных 1 минута. Для визуализации использовали 30 нМ меченных AF488 донорных нитей и 20 нМ меченных Cy5 акцепторных нитей. На рис. 3b и c показаны изображения сверхвысокого разрешения, полученные с помощью нового микроскопа с частотой кадров 100 Гц для рис. 3b или 200 Гц для рис. 3c. Для визуализации общее время сбора данных составляло 1 мин, и использовались 300 нМ CF488A-меченые донорные нити и 300 нМ Cy5-меченые акцепторные нити. Как видно из рисунков, новый микроскоп позволял получать изображения более высокого качества, чем предыдущая установка FRET-PAINT, за более короткое время. Ширина поперечного сечения микротрубочек была аналогична ранее сообщаемому значению (дополнительный файл 1: рисунок S2) [11]. Чтобы более подробно показать улучшенное качество изображения, на рис. 3d-f также показаны цейтраферные изображения выделенных рамкой областей рис. 3a-c соответственно. Чтобы количественно сравнить качество изображения на рис. 3a-c, мы сравнили разрешение изображения в зависимости от времени получения изображения (рис. 3g). Разрешения получены методом кольцевой корреляции Фурье [16, 17]. Заметно, что разрешение достигло предела (42 нм для 100 Гц, 46 нм для 200 Гц) через 20–30 с с новой настройкой FRET-PAINT, тогда как разрешение все еще снижается даже через 60 с с предыдущей FRET-PAINT настраивать. В принципе, разрешение, определяемое методом кольцевой корреляции Фурье, зависит как от точности локализации, так и от плотности локализации [16,17,18,19].]. Плотность локализации линейно пропорциональна времени визуализации (рис. 3h), тогда как точность локализации не зависит от времени. Таким образом, можно сделать вывод, что для десятков секунд времени съемки разрешение изображения определяется точностью локализации в новом микроскопе. С другой стороны, для того же времени получения изображения разрешение изображения определяется плотностью локализации в старом микроскопе. Плотность локализации как функция времени визуализации на рис. 3h дает еще один способ сравнить скорость визуализации микроскопов. Скорость локализации увеличилась в 5,4 раза для изображения с частотой 100 Гц и в 8 раз для изображения с частотой 200 Гц.
Рис. 3| Характеристика скорости изображения нового микроскопа. В качестве модельной системы использовали изображения микротрубочек сверхвысокого разрешения фиксированных клеток COS-7. ( a ) Изображение реконструировано из 600 кадров, записанных с частотой кадров 10 Гц с помощью предыдущего микроскопа (камера EMCCD, длиннополосный фильтр, 460 Вт/см 2 мощность возбуждения, 30 нМ 9 нт AF488 донорные нити, 20 нМ 10 нт акцепторных цепей Cy5). ( b , c ) Изображения были реконструированы из 6000 кадров, записанных с частотой кадров 100 Гц ( b ) или 12 000 кадров, записанных с частотой кадров 200 Гц ( c ) на новом микроскопе (камера sCMOS, полосовой фильтр, 460 Вт/см 2 мощность возбуждения, 300 нМ 7 nt CF488A донорные нити, 300 нМ 9 нт акцепторных цепей Cy5). Буфер для визуализации (10 мМ Tris-HCl, pH 8,0, 500 мМ NaCl, 1 мг/мл глюкозооксидазы, 5 мг/мл глюкозы, 0,04 мг/мл каталазы и 1 мМ Trolox) использовался для всех изображений. Все изображения были реконструированы с помощью ThunderSTORM [23] с методом максимального правдоподобия. Общее время визуализации составляет 60 с для всех изображений. ( d — f ) Покадровые изображения выделенных областей в a — c в указанное время визуализации. ( g ) Разрешение изображения a — c с использованием метода кольцевой корреляции Фурье в зависимости от времени формирования изображения. Незакрашенные квадраты обозначают измеренное значение, а сплошные линии обозначают аппроксимированные кривые с экспоненциальной функцией затухания. ( h ) Плотность локализации как функция времени изображения (100 Гц, черный; 200 Гц, красный; 10 Гц, синий). Плотность локализации определяется как количество событий локализации на 1 мкм 2 . Чтобы свести к минимуму влияние области интереса, выбранной для анализа данных, плотность локализации была рассчитана для 10 различных областей 5 разных клеток. Квадраты указывают среднее значение, а планки погрешностей указывают стандартное отклонение. Темпы роста плотности локализации составили 21 (10 Гц), 114 (100 Гц) и 168 (200 Гц) локализаций/мкм 2 /с. Мы получили увеличение в 5,4 раза для изображения с частотой 100 Гц и увеличение в 8 раз для изображения с частотой 200 Гц по сравнению со старым микроскопом. Шкала баров: 5 мкм ( a — c ), 1 мкм ( d — f )
Полноразмерное изображение
Обсуждение
Таким образом, мы разработали высокоскоростной микроскоп FRET-PAINT с ограниченной точностью, который может обеспечить локализацию и точность. изображения сверхвысокого разрешения за десятки секунд. Для этого мы оптимизировали несколько экспериментальных параметров, таких как скорость камеры, время диссоциации донорных нитей и прохождение донорских сигналов в акцепторный канал.
По сравнению с работой Auer et al. которые утверждали, что изображения микротрубочек со сверхвысоким разрешением могут быть получены за несколько десятков секунд [11], наша работа имеет несколько улучшений в следующих отношениях. Во-первых, они использовали стыковочную нить, постоянно помеченную акцептором, для визуализации клеток, и в результате общее время визуализации их подхода все еще было ограничено фотообесцвечиванием акцептора. Во-вторых, они использовали 9nt донорная нить, время диссоциации которой оценивается примерно в 1 с. Несмотря на то, что они использовали высокую концентрацию донора (500 нМ) и короткое время интеграции (14 мс), пятна одиночных молекул серьезно перекрываются с 9-нуклеотидной донорной нитью, и в результате общая скорость визуализации их приближения определяется диссоциацией донора. время, как полностью продемонстрировано в нашей предыдущей статье [10]. Невозможно напрямую сравнить скорость визуализации их подхода с нашей, потому что Auer et al. охарактеризовали точность локализации только с использованием анализа ближайших соседей [20] без информации о плотности локализации для реконструкции изображения; они обеспечивали только потенциально достижимое пространственное разрешение, но не реальное разрешение, достигаемое экспериментально. Однако мы думаем, что их скорость визуализации была аналогична скорости нашей предыдущей версии микроскопа FRET-PAINT, где мы использовали 9нт донорная цепь. Разрешение флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения, основанное на локализации одиночных молекул, определяется не только точностью локализации одиночных молекул, но также следует учитывать плотность локализации одиночных молекул для реконструкции изображения. Поэтому повышенная скорость визуализации в работе по сравнению с предыдущими работами [10, 11] означает улучшение разрешения при том же времени визуализации (рис. 3ж).
Итак, мы достигли конечного предела скорости микроскопии FRET-PAINT? Мы считаем, что еще есть место для улучшений. На рисунке 2d показано, что мы можем использовать гораздо более высокие концентрации донорной цепи, чем 300 нМ, без ущерба для SNR. Точность локализации также может быть улучшена за счет сбора большего количества фотонов. Используя донорную подставку из 6 нт, можно также увеличить скорость переключения донорной нити. Однако включение всех этих изменений в микроскоп для увеличения скорости визуализации требует более высокой интенсивности возбуждения, чтобы компенсировать уменьшение числа фотонов, вызванное сокращением срока службы зондов. К сожалению, мы обнаружили, что эта простая схема не работает; мы обнаружили, что количество пятен с одной молекулой уменьшалось в зависимости от мощности лазера по мере продолжения визуализации (дополнительный файл 1: рисунок S3a). Поэтому мы пришли к выводу, что ДНК-зонды, используемые в FRET-PAINT, были повреждены лазером возбуждения высокой интенсивности. Такого рода фотоиндуцированные повреждения не были обнаружены в предыдущих работах, где использовалась относительно слабая мощность возбуждения [10, 11]. Чтобы определить, какое повреждение произошло, мы провели дополнительные эксперименты. Введение свежих ДНК-зондов не решило проблему (дополнительный файл 1: рисунок S3b). Фоновый шум флуорофоров не уменьшился во время визуализации (дополнительный файл 1: рисунок S3c). Следовательно, повреждение представляет собой не простое фотообесцвечивание флуорофоров, а, по-видимому, потерю способности стыковочной нити образовывать пары оснований. Интересно, что мы обнаружили, что фотоиндуцированное повреждение проявляет вариацию от образца к образцу (дополнительный файл 1: рисунок S3d). Поиск способа систематического решения фотоиндуцированной проблемы позволит нам реализовать получение изображений за доли миллисекунды для получения изображений со сверхвысоким разрешением. В сочетании с недавно разработанной конфокальной микроскопией в режиме реального времени [21, 22] наша ускоренная микроскопия FRET-PAINT обеспечит способ реконструкции трехмерных структур толстых образцов нервной ткани как с высокой скоростью, так и с высоким разрешением.
Методы
Материалы
Модифицированные олигонуклеотиды ДНК были приобретены у компании Bioneer (Тэджон, Республика Корея). AF488 (Alexa Fluor 488 NHS Ester, каталожный номер: A20000) и покровное стекло Nunc Lab-Tek (каталожный номер: 155383PK) были приобретены у Thermo Fisher Scientific. CF488A (сукцинимидиловый эфир CF®488A, каталожный номер: 92120) и CF660R (сукцинимидиловый эфир CF®660R, каталожный номер: 92134) были приобретены у Biotium. Cy5 (Cy5 NHS Ester, каталожный номер: PA15101) был приобретен у GE Healthcare Life Sciences. Клетки COS-7 были приобретены в Korean Cell Line Bank. Антитело к тубулину (каталожный номер: ab6160) было приобретено у Abcam. Ослиное анти-крысиное IgG-антитело (каталожный номер: 712–005-153) было приобретено у Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc. Стыковочные нити были конъюгированы со вторичными антителами с использованием универсального набора для конъюгации антитело-олигонуклеотид (каталожный номер: A -9202-001), приобретенный у Solulink. Глутаровый альдегид (каталожный номер: G5882), Triton X-100 (каталожный номер: T9284), боргидрид натрия (каталожный номер: 452882-5G) и бычий сывороточный альбумин (каталожный номер: A4919) были приобретены у Sigma-Aldrich.
Мечение ДНК флуорофорами
Олигонуклеотиды ДНК, модифицированные амином, были помечены флуорофорами, имеющими химическую группу сложного эфира NHS. 5 мкл 1 мМ ДНК смешивали с 25 мкл 100 мМ буфера тетрабората натрия (pH 8,5). Затем добавляли 5 мкл 20 мМ флуорофора в ДМСО. После тщательного перемешивания смесь инкубировали при 4 °C в течение ночи в защищенном от света месте. 265 мкл дистиллированной воды, 9Добавляли 00 мкл этанола и 30 мкл 3 М ацетата натрия (pH 5,2) и тщательно перемешивали. Смесь инкубировали при - 20 °C в течение часа, а затем центрифугировали в течение нескольких часов, пока осадок ДНК не стал отчетливо виден. Если осадок не виден, смесь инкубировали при - 20 °C в течение ночи или нескольких дней. Супернатант удаляли, а осадок промывали холодным этанолом. После полного выпаривания этанола осадок ресуспендировали в 50 мкл воды MilliQ и измеряли эффективность мечения с помощью спектрофотометра (Nanodrop 2000, Thermo Fisher Scientific). Если эффективность маркировки низкая, весь процесс маркировки повторяли. Если эффективность мечения превышает 100%, стадию очистки повторяют.
Культура клеток, фиксация и иммуноокрашивание
Клетки COS-7 выращивали на покровном стекле Nunc Lab-Tek в течение суток. Клетки дважды быстро промывали буфером PBS при 37°C, предварительно экстрагировали буфером для предварительной экстракции при 37°C (0,4% глутаральдегида, 0,25% Triton X-100 в буфере PBS) в течение 20 с, фиксировали буфером для фиксации при 37°C. (3% глутаральдегида в буфере PBS) в течение 10 мин и промывали буфером PBS 3 раза (по 5 мин каждый) для удаления непрореагировавших свободных молекул глутаральдегида. Непрореагировавшие альдегидные группы гасили гасящим буфером (1 мг/мл боргидрида натрия в буфере PBS) 3 раза (по 4 мин каждый). Затем клетки промывали буфером PBS 3 раза (каждый раз по 5 мин). Микротрубочки подвергали иммуноокрашиванию путем инъекции первичных антитубулиновых антител в разведении 1:100 в блокирующем буфере (5% альбумина бычьей сыворотки и 0,25% тритона Х-100 в буфере PBS) в камеру и инкубации при комнатной температуре в течение часа. Свободные антитубулиновые антитела промывали блокирующим раствором 3 раза (каждый раз по 5 мин). Затем в камеру вводили 100 нМ вторичных антител, конъюгированных с стыковочными нитями, и инкубировали при комнатной температуре в течение часа. Свободные вторичные антитела отмывали буфером PBS 3 раза (каждый раз по 5 мин).
Флуоресцентная визуализация одиночных молекул
Для визуализации FRET-PAINT мы использовали донорную цепь из 7 нуклеотидов, меченную CF488A, и 9 нуклеотидов, меченную Cy5, акцепторную цепь. Мощность возбуждения составляла 1,5 кВт/см 2 на 473 нм. Сигнал Cy5 фильтровали полосовым фильтром (ET700/75 m, Chroma) и визуализировали с помощью инвертированного микроскопа (IX71, Olympus), оснащенного масляным иммерсионным объективом (100 × 1,4 NA, UPlansSApo, Olympus) и sCMOS. камера (ORCA-Flash 4.0 V2, Hamamatsu) со временем интегрирования 5 или 10 мс. Для всех экспериментов использовали идентичный буфер для визуализации (10 мМ трис-HCl, pH 8,0, 500 мМ NaCl, 1 мг/мл глюкозооксидазы, 5 мг/мл глюкозы, 0,04 мг/мл каталазы в насыщенном растворе Trolox).
Сокращения
Ссылки
- «>
Hell SW, Wichmann J. Нарушение предела дифракционного разрешения с помощью стимулированного излучения: флуоресцентная микроскопия с истощением стимулированного излучения. J Opt Lett. 1994;19:780–2.
КАС Статья Google ученый
Шаронов А, Хохштрассер РМ. Широкопольная субдифракционная визуализация за счет накопленного связывания диффундирующих зондов. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006; 103:18911–6.
КАС Статья Google ученый
Nieuwenhuizen RPJ, Lidke KA, Bates M, Puig DL, Grünwald D, Stallinga S, Rieger B. Измерение разрешения изображения в оптической наноскопии. Нат Методы. 2013;10:557–62.
КАС Статья Google ученый
Ссылки на скачивание
Благодарности
Неприменимо.
Финансирование
Эта работа была поддержана грантом Инициативы творческих исследований (Лаборатория физической генетики, 2009–0081562) компании S.H.
Доступность данных и материалов
Наборы данных, созданные и проанализированные в ходе текущего исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу.
Author information
Authors and Affiliations
Авторы
Contributions
JL и SH разработали эксперименты. JL и SP проводили эксперименты и анализировали данные. Все авторы внесли свой вклад в написание статьи. С.Х. руководил исследованием. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.
Автор, ответственный за переписку
Сунгчул Хон.
Декларация этики
Утверждение этики и согласие на участие
Неприменимо.
Согласие на публикацию
Не применимо.
Конкурирующие интересы
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.
Примечание издателя
Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и институциональной принадлежности.
Доп. файл
Доп. файл 1:
Ускоренная микроскопия FRET-PAINT. Рисунок S1. Спектры возбуждения Cy5 (черный) и CF660R (красный). Рисунок S2. Гистограмма поперечного сечения микротрубочек. Рисунок S3. Фотоиндуцированное повреждение ДНК-зондов. (DOCX 538 kb)
Права и разрешения
Открытый доступ Эта статья распространяется на условиях международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что вы укажете первоначальных авторов и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажете, были ли внесены изменения. Отказ Creative Commons от права на общественное достояние (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное.
Перепечатки и разрешения
Об этой статье
Работники отеля беспокоятся о новом сопернике: Алекса на стойке регистрации
Реклама
Продолжить чтение основной истории как и другие сети, внедряет все больше и больше технологий в своих отелях. Кредит … Мишель Мишина-Кунц для The New York Times
Боссы еще не внедрили технологию распознавания лиц в Королевский гавайский отель. Но со своего места за стойкой регистрации в розовом нео-мавританском дворце с видом на пляж Вайкики Джин Тео-Гибни может предвидеть это.
«Marriott только что запустила его в Китае, позволив гостям заселяться в свои номера, не беспокоясь о формальностях на стойке регистрации», — сказала г-жа Тео-Гибни, 53-летняя бабушка семи лет. «Кажется, они знают, что будут сокращать наши рабочие места».
Подобные страхи кипят в обширной сети отелей Marriott, крупнейшей в США. За последние две недели г-жа Тео-Гибни и тысячи других работников Marriott — повара и кассиры, посыльные и домработницы — проголосовали за разрешение их профсоюзу Unite Here провести забастовку в десятках заведений от Вайкики до Бостона и Сан-Франциско. Диего в Детройт.
Наряду с обычными требованиями повышения заработной платы и улучшения безопасности на рабочем месте, профсоюз выносит на обсуждение еще один вопрос, требуя процедур для защиты работников, затронутых новыми технологиями и инновациями, которые они стимулируют.
«Вы не собираетесь останавливать технологии», — сказал президент Unite Here Д. Тейлор. «Вопрос в том, будут ли рабочие партнерами в его развертывании или сторонними наблюдателями, которых он задавит».
В отличие от производственных рабочих, чьи рабочие места были потеряны из-за автоматизации еще в 1950-х годов работники низкооплачиваемой части сектора услуг до сих пор оставались в значительной степени защищенными от технологий, убивающих рабочие места.
Многие зарабатывают слишком мало, чтобы оправдать большие капитальные затраты на их замену. Согласно правительственным данным, типичный клерк отеля или мотеля зарабатывает чуть более 12 долларов в час; консьерж чуть более $ 13,50. И многие из выполняемых ими задач казались слишком сложными для автоматизации. Технологии меняют этот расчет.
Не существует эквивалентной меры по проникновению программных систем, таких как Alexa, или сенсорных экранов на рабочем месте. Но в 2014 году у автопроизводителей в США было 117 роботов на каждую 1000 рабочих, согласно исследованию, проведенному экономистами Дароном Асемоглу из Массачусетского технологического института и Паскуалем Рестрепо из Бостонского университета. В сфере услуг их практически не было.
Но благодаря достижениям в области машинного обучения и другим инновациям в области информационных технологий многие рабочие места в сфере обслуживания теперь потенциально находятся под угрозой. По сравнению с производством инвестиции, необходимые для автоматизации некоторых задач в гостиничном секторе, таких как стойка регистрации или услуги консьержа, скорее всего, будут относительно низкими.
Мария Мендиола, консьерж в отеле San Jose Marriott, обеспокоена тем, что согласие Amazon установить свое устройство Echo в гостиничных номерах отелей Marriott в конечном итоге сделает ее позицию бессмысленной. «Alexa может выполнять мою работу в будущем», — сказала она.
В отеле Sheraton Waikiki, расположенном рядом с отелем Royal Hawaiian, кассиры в пляжном лаундже беспокоятся о недавно установленной компьютерной системе, которая позволит серверам закрывать свои собственные чеки, что делает кассиров излишними.
На рынке есть автоматические посудомоечные машины; машины для переворачивания бургеров и смешивания коктейлей; роботы для обслуживания номеров или помощи гостям в бронировании столика в ресторане.
Новые технологии меняют конфигурацию рабочего места другими способами. Швейцары теряют чаевые, поскольку гости обращаются к Uber и Lyft вместо обычных такси. То же самое происходит и с посыльными, когда гости используют приложение для доставки еды Seamless вместо обслуживания номеров.
Сколько рабочих мест сократят технологии? Отельерам еще предстоит выяснить, как гости отреагируют на более технологичный опыт. Представитель Marriott заявила в своем заявлении, что сеть не внедряла технологии для сокращения рабочих мест, а «персонализировала впечатления гостей и улучшала их пребывание».
Клифф Аткинсон, старший вице-президент по гостеприимству в MGM Resorts, сказал, что новые технологии изменили должностные инструкции в отелях его сети, но не сократили количество рабочих мест. Клерки на стойке регистрации, замененные автоматическими киосками регистрации, используются в качестве «послов в вестибюле» или консьержей.
Тем не менее, история показывает, что самой мощной мотивацией для внедрения новых технологий была возможность снизить затраты на оплату труда. По оценкам профессоров Асемоглу и Рестрепо, с 1993 по 2007 год каждый новый робот сокращал 5,6 рабочих мест и снижал заработную плату на 0,5 процента.
Кассиры в пляжных барах беспокоятся, что новые технологии позволят официантам закрывать собственные чеки, а будущее, в котором в каждом номере есть устройство Echo, создаст проблемы для консьержей. и дешевле, есть много новых задач, которые он может взять на себя. «Это новая, неизведанная область для нашей компании и нашей отрасли в целом, — сказал г-н Аткинсон. «Мы говорили об одном или двух брендах, которые полностью автоматизированы и самообслуживаются для гостей».Дэвид Отор, экономист Массачусетского технологического института, говорит, что вполне правдоподобно предвидеть будущее, в котором, как это сделали авиакомпании, отели используют людей для обслуживания элитных гостей и автоматизированных систем для всех остальных. Профессор Аутор утверждает, что рабочие несут затраты, намного превышающие их почасовую оплату. Они болеют, берут отпуск и нуждаются в менеджерах. «Люди беспорядочны», — отметил он. «Машины просты».
В прошлом году Глобальный институт McKinsey опубликовал отчет, в котором прогнозируется, что технологии вызовут 30-процентное сокращение рабочих мест в сфере общественного питания и жилья с 2016 по 2030 год. Это почти соответствует 38-процентному сокращению рабочих мест в обрабатывающей промышленности с 1960 на 2012 год.
Профсоюзы не хотят, чтобы история производства повторилась в сфере услуг. «Мы пытаемся опередить это», — сказал Ананд Сингх, президент Unite Here’s local в Сан-Франциско. «Мы не луддиты, но мы ищем настоящего голоса за столом».
Международное братство водителей тоже обеспокоено тем, что технологии врываются в настоящее. Начав в этом году переговоры по контракту с United Parcel Service, профсоюз выдвинул смелое предложение: запретить использование дронов или автономных транспортных средств для доставки посылок. Но в сентябре, когда профсоюз разослал соглашение своим членам на голосование о ратификации, такого положения не было.
Эдвард Виткинд, который до этого года возглавлял Департамент транспортных профессий Американской федерации труда и КПП, сказал, что профсоюзы не смогут остановить технологии, даже если попытаются. «Возможно, вы сможете остановить его с помощью одного раунда переговоров или замедлить его», — сказал он. «Но инновации продолжаются уже 100 лет и никогда не прекращались».
И он отметил, какой может быть цена успеха: «Выигрываем ли мы будущее для рабочих? Нет, если компания обанкротится».
Лучшей стратегией может быть требование участия в развертывании технологий.
Предварительное соглашение Teamsters с U.P.S., например, требует шестимесячного предварительного уведомления профсоюза о внедрении технологий и создания комитета с представителями профсоюза и компании, который будет вести переговоры «относительно последствий предлагаемых технологических изменений». ».
Члены профсоюза Unite Here проголосовали за санкционирование забастовки в отеле Royal Hawaiian и десятках других заведений Marriott из-за проблем, связанных с процедурами защиты работников, затронутых новыми технологиями. Кредит… Мишель Мишина-Кунц для The New York TimesUnite Here идет тем же путем. Г-н Сингх перечислил цели профсоюза по контрактам с Marriott: «Мы хотим поговорить о том, как технологии могут помочь в работе, которую мы выполняем, и облегчить нашу работу, как проходят обучение наши члены, что происходит с работниками, которые в противном случае были бы помечены как уволенные. , как наши участники переориентируются на успех или нанимаются на другие рабочие места».
В июне профсоюзу впервые удалось включить защиту от технологических изменений в свои контракты с работниками объектов MGM Resorts и Caesars Entertainment в Лас-Вегасе. Рабочие будут обучены выполнять работу, созданную или измененную с помощью новых технологий, что позволит им участвовать в повышении производительности. Контракты также предусматривают, что компания попытается найти работу для уволенных работников. Но главным достижением профсоюза было получение 180-дневного предупреждения о внедрении технологий.
«Они должны сообщить нам и показать нам прототипы и должны вести с нами переговоры», — сказал мистер Тейлор. «В конце концов, они могут двигаться вперед, но это дает нам время, чтобы понять последствия».
Если бы они могли выбрать прецедент из истории американского труда, сегодняшние профсоюзные лидеры могли бы пойти по пути Международного профсоюза грузчиков и складов.
В 1960-х и 1970-х докеры были поражены одним из самых революционных технических нововведений 20-го века: контейнерами. Одним махом контейнеры сократили время и количество рабочих, необходимых для загрузки корабля, сэкономив огромные суммы денег.
Вместо того, чтобы пытаться остановить большие ящики, профсоюз грузчиков на Западном побережье потребовал долю добычи: богатые пенсионные пособия для уволенных рабочих и солидное вознаграждение для тех, кто остался. В результате грузчики, работающие полный рабочий день круглый год, теперь зарабатывают в среднем от 168 000 до 186 000 долларов в год.
Но для такой сделки нужно много сил. Портовый союз может по своему желанию закрывать порты, что влечет за собой огромные расходы грузоотправителей. Для рабочих, не имеющих такого влияния, достижения портовых грузчиков кажутся недосягаемыми.
Единство Здесь не бессильны. Согласно государственной статистике, в общенациональном масштабе только 7,6% работников гостиничного бизнеса состоят в профсоюзах. Но в Сан-Франциско, например, Unite Here представляет 89% работников отелей класса А. Отчасти поэтому домработницы в Сан-Франциско зарабатывают 22,64 доллара в час, отмечает профсоюз, что более чем вдвое превышает средний показатель по стране, составляющий 10,09 доллара.
Объединяйтесь До сих пор победы давались с большим трудом. «Это был нелегкий вопрос», — сказал г-н Тейлор о языке технологий в сделках в Лас-Вегасе. «Это действительно нарушает право отелей делать то, что они хотят».
Результат может принести или не принести большую долю прибыли от технологий работникам. Но клерки на стойке регистрации и консьержи будут иметь лучшие варианты, чем выходное пособие, когда Alexa или компьютерное программное обеспечение возьмет на себя некоторые из их задач. «Это было хорошее решение, — сказал г-н Тейлор. «Время покажет, достаточно ли это хорошо».
Уровни ладов и рефреты: Redux — Haze Guitars
Я всегда хотел найти способ использовать «редукс». Я виню Копполу. 😉
—
Итак, мы признали, что лады являются расходными материалами. Давайте начнем рассматривать некоторые из доступных вариантов, чтобы справиться с этим фактом жизни.
Кстати, я уже затрагивал эти темы раньше, но хочу немного расширить их, поэтому стоит вернуться к этому фрагменту еще раз.
Если дело в том, что у вас есть некоторый износ ладов, и если этот износ достаточен, чтобы стать навязчивым — скорее всего, с жужжанием ладов или удушающими нотами — наш первый и, скорее всего, вариант — лад уровня 9.1348 .
Уровень лада
Иногда уровень лада называют «одеждой» лада, а иногда — «забивкой лада» (вероятно, потому, что исторически точильные камни были хорошим способом выравнивания ладов).
Когда подходит уровень лада?
Если износ не слишком глубокий и/или изношенные лады имеют достаточную высоту (подробнее см. ниже), вероятно, будет возможно провести уровень.
Что такое уровень лада?
Под выравниванием ладов подразумевается процесс шлифовки верхних частей ладов, чтобы убедиться, что каждый из них находится в одной плоскости* со всеми остальными.
В случае новых установленных ладов (или накладки с неровными ладами) это означает удаление большего количества металла с верхних частей любых высоких ладов, чтобы довести их до уровня соседних.
В случае старых ладов с пятнами износа процесс выравнивания удалит некоторое количество металла с вершин неизношенных ладов — чтобы довести их до высоты изношенных — и «выравнивает» изношенные лады, чтобы они одинаковы по всей длине.
После того, как все лады выровнены, их обычно оставляют со сплющенной верхней частью. На самом деле это похоже на то, что вы видите в изношенном ладу, но, по крайней мере, каждый лад соответствует своей длине и своим соседям.
Теперь лады повторно коронованы . Увенчание формирует каждый лад таким образом, чтобы убрать более твердые выступы, поэтому оставьте красивую округлую форму с положительной точкой трения точно по центру лада.
Есть один производитель, который часто пропускает этот завершающий этап, оставляя лады, которые могут показаться некоторым исполнителям немного более неудобными — лады все еще имеют то же твердое, квадратное ощущение. Лично я считаю, что коронка является жизненно важной частью хорошей работы.
*Я говорю тот же самолет , а не ту же высоту, так как это более точное описание. Высота ладов может постепенно увеличиваться или уменьшаться вдоль грифа, но до тех пор, пока плоскость (или линия поперек их вершин) постоянна, лады будут играть чисто.
Refret
Если износ ладов настолько велик, что уровень ладов оставит лады слишком низкими для удобной и чистой игры, вероятно, требуется повторная обработка.
Когда уместна повторная обработка?
Кто-то недавно написал мне по электронной почте, чтобы спросить, какова высота «среза» (когда уровень лада больше невозможен и требуется повторная обработка). Должен признаться, у меня не было цифры, чтобы назвать. Этому есть две причины.
Во-первых, это то, что я всегда запускал на какой-то странной комбинации инстинкта и опыта. Обычно я могу сделать довольно хороший звонок, основываясь на оценке вещей.
И, во-вторых, не обязательно одинаково для всех игроков. Этот момент важен. Некоторые музыканты с радостью будут играть на гитарах типа «Fretless Wonder» с мельчайшим кусочком металла, оставшимся на ладах, а некоторые будут бороться с низкими ладами. Каждая работа должна оцениваться с учетом игрока…
Но…
Из-за смущения, что у меня нет цифры, мне пришлось взглянуть на некоторые инструменты в мастерской и попытаться что-то экстраполировать.
Итак, мой совет в большинстве обстоятельств заключается в том, что высота лада менее 0,025 дюйма (около 0,65 мм), вероятно, является нижним пределом для большинства музыкантов. Меньше этого, и вы, вероятно, находитесь на территории повторения.
Что входит в рефрет?
Существующие лады снимаются с грифа перед установкой новых. Затем новые лады выравниваются.
Очевидно, что все немного сложнее, чем это, и следует проявлять осторожность при выполнении работы или выборе техники, которая сделает это за вас. Исправление неудачного рефрета может стоить дороже, чем его правильное выполнение с первого раза.
В какой-то момент в будущем я расскажу более подробно о том, как это сделать, а пока знайте, что хороший рефрет — это не просто вытягивание старых ладов и забивание новых. Это, безусловно, часть дела, но правильно выполненный рефрет дает возможность оценить и решить любые проблемы, связанные с состоянием грифа и накладки грифа. Проблемы рельефа, неровности, проблемы с радиусом, инкрустация, прорези для ладов, крепления и многое другое можно решить до установки новых ладов.
После замены ладов их концы скошены и сглажены. Затем они выравниваются (тот же процесс, что описан выше).
Часто после переделки приходится менять и гайку. Что часто происходит, так это то, что прорези в существующей гайке теперь слишком низкие по сравнению с новыми ладами. Конечно, при желании также существует возможность прокладки гайки.
Как насчет новой шеи?
Существует и другой, менее распространенный вариант (если у вас есть подходящая гитара или бас).
Просто замените горловину.
Лео построил свои гитары модульными — если им нужен новый гриф, просто прикрутите новый гриф.
С точки зрения стоимости, это, безусловно, конкурент. Но есть причины, по которым это обычно не выбранный путь.
Большинству гитаристов не нравится идея замены, особенно если уже установлен «правильный» фирменный гриф от производителя этой гитары. Иногда бывает сложнее заменить его грифом с справа 9.Например, логотип 1348.
Лицензионные грифы имеют идеальную конструкцию, но на них не будет логотипа.
Стоит также учитывать, что серийный номер инструмента часто находится только на грифе.