полный каталог моделей, характеристики, отзывы на все автомобили Lada (Лада)

По-русски

Лада

Категория бренда

Российские автомобили

Год основания:

1971

Основатели:

ЦК КПСС и Советское правительство

Количество моделей:

20

Принадлежит:

ОАО «АвтоВАЗ»

Новостей на сайте:

1096 перейти

Наших тест-драйвов:

52 перейти

---

---

---

Автомобили Lada

• 2104

  1 поколение, 1984 — сегодня

• 2107

  1 поколение, 1982 — сегодня

• 2110 (2111,21112)

  1 поколение, 1996 — 2010

• 4×4

  1 поколение, 1995 — 2018

• Granta

  2 поколения, 2011 — сегодня

• Granta Cross

  1 поколение, 2019 — сегодня

• Granta Sport

  1 поколение, 2017 — сегодня

• Kalina

  2 поколения, 2004 — сегодня

• Kalina Cross

  1 поколение, 2016 — сегодня

• Kalina NFR

  1 поколение, 2017 — сегодня

• Kalina Sport

  1 поколение, 2017 — сегодня

• Largus

  2 поколения, 2012 — сегодня

• Largus Cross

  1 поколение, 2014 — 2019

• Priora

  1 поколение, 2009 — сегодня

• Samara

  1 поколение, 2001 — сегодня

• Vesta

  1 поколение, 2015 — сегодня

• Vesta Cross

  1 поколение, 2018 — сегодня

• Vesta Sport

  1 поколение, 2019 — сегодня

• XRay

  1 поколение, 2015 — сегодня

• Xray Cross

  1 поколение, 2019 — сегодня

---

О Lada

Компания ОАО «АвтоВАЗ» является крупнейшим производителем автомобилей в России. Бренд Lada принадлежит российскому автогиганту со времен СССР. Основная производственная мощность расположена в Самарской области в городе Тольятти. История компании началась с 1967 года, когда был построен завод совместно с итальянским FIAT. Первый автомобиль сошел с конвейера в 1970 году. Это был седан ВАЗ-2101, сделанный на базе FIAT-124. Через 7 лет появился на свет первый полноприводный внедорожник компании «Нива». Начало массового производства пеерднеприводных машин в России положил выпуск в 1984 году модели ВАЗ-2108 или Lada Samara. На сегодняшний день Lada расширила свой модельный ряд переднеприводных автомобилей семействами Kalina и Priopa. Кроме того, не останавливается производство машин повышенной проходимости совместно с американским концерном Chevrolet. В ближайшие годы «АвтоВАЗ» планирует выпуск еще семи совершенно новых моделей под именами: Quanta, Alegra, Slavia, Adera, Terra и Fortuna.

---

Все модели Lada

Новинки Лада 2018 года | Все автомобили Lada вышедшие в этом году

В последние годы концерн АвтоВАЗ переживает второе рождение. В модельном ряду появилось множество новинок, которые действительно нравятся россиянам и занимают лидирующие позиции по продажам. Но самое главное, – произошли серьезные качественные изменения – автомобили LADA стали более современными как внутри, так и снаружи. На них комфортно, безопасно и не стыдно ездить!

Еще одним изменением стала практика регулярных обновлений, которую исповедуют ведущие автопроизводители. Если раньше отдельные модели АвтоВАЗ десятилетиями выпускались без всяких изменений, то теперь почти каждый год компания предлагает если не глубокую модернизацию, то, как минимум, рестайлинг.

В 2018 году центральным событием стал Московский автосалон, где были представлены последние новинки LADA. Всего их оказалось целых пять!

Новые модели LADA 2018 года

• Новая «Нива». Главный фурор произвел концепт-кар LADA 4×4 Vision, производство которого намечено на 2022 год. Несмотря на свое название, он абсолютно не похож на свой классический оригинал, внешний вид которого не менялся с 70-х. Внедорожная LADA в новом кузове напоминает скорее Renault Duster, однако «вазовский» стиль последних лет также присутствует в виде «Икс-образных» выштамповок.
• Обновленная Granta. Одна из наиболее ожидаемых новинок. Самую доступную машину в модельном ряду АвтоВАЗ наметили к покупке многие россияне и с волнением ждали цен. И не разочаровались – стоимость авто почти не изменилась (всего на 10 тысяч дороже). При этом были улучшены его ходовые качества и внешний вид. Новая LADA Ganta будет доступна в пяти версиях – седан, хэтчбек, лифтбек и универсал (обычный и Cross).
• Спортивная Vesta. Новая LADA Vesta Sport унаследовала внешний вид представленного ранее концепт-кара Vesta Sport Concept. Ее внешний вид стал более агрессивным – появились спортивные накладки переднего бампера, 17-дюймовые литые диски с низкопрофильными шинами и расширенные колесные арки на передних крыльях.
• Внедорожная Vesta. Еще одна модификация Vesta, но уже с прицелом на проходимость. 17-дюймовые колеса и увеличившийся до 203 мм клиренс позволяют новой LADA Vesta Cross уверенно себя чувствовать в условиях бездорожья. Модель оснащается системой контроля устойчивости ECS и полным комплектом фронтальных подушек безопасности.
• Обновленный Xray. В 2018 новая LADA Xray Cross стала еще более «внедорожной», если можно так сказать. Ее клиренс увеличился до 215 мм, а подвеска обзавелась новыми передними рычагами, пружинами и амортизаторами. Также появились предустановки режимов движения для различных условий и дорожных покрытий. Из внешних изменений отметим 17-дюймовые колеса, новый передний бампер защитный пластиковый «пояс».

Уточнить цены и комплектации LADA 2018 года всех моделей вы сможете на сайте компании ФОРСАЖ, официального дилера АвтоВАЗ в Санкт-Петербурге.

ВАЗ — все модели Lada 2022: характеристики, цены, модификации, видео, дилеры

Все модели ВАЗ 2022 года: модельный ряд автомобилей Lada, цены, фото, обои, технические характеристики, модификации и комплектации, отзывы владельцев ВАЗ, история марки Lada, обзор моделей ВАЗ, архив моделей Lada. Также здесь вы можете найти «горячие» предложения от дилеров марки ВАЗ.

В нашем каталоге указаны ориентировочные цены на автомобили ВАЗ. Если Вы хотите приобрести определенную модель Lada из числа представленных на сайте — обращайтесь к официальным дилерам ВАЗ в вашем городе или регионе.

От 600 000 ₽

Внедорожник

Россия

Год: 2021

От 645 000 ₽

Внедорожник

Россия

Год: 2021

От 704 000 ₽

Седан

Россия

Год: 2015

От 852 000 ₽

Седан

Россия

Год: 2017

От 1 110 000 ₽

Седан

Россия

Год: 2018

От 791 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2017

От 906 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2017

От 500 000 ₽

Седан

Россия

Год: 2018

От 616 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2018

От 522 000 ₽

Хэтчбек

Россия

Год: 2018

От 529 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2018

От 545 500 ₽

Хэтчбек

Россия

Год: 2018

От 680 000 ₽

Хэтчбек

Россия

Год: 2015

От 791 000 ₽

Кроссовер

Россия

Год: 2018

От 691 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2021

От 866 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2021

От 686 000 ₽

Фургон

Россия

Год: 2021

От 738 000 ₽

Внедорожник

Россия

Год: 2020

Архив моделей марки Lada

История АвтоВАЗ

В 1967 году в СССР приступили к строительству Волжского автомобильного завода в г. Тольятти. Первым генеральным директором завода был Поляков В.Н. В 1971 году завод вступил в строй, его первая очередь была рассчитана на выпуск 220000 легковых автомобилей в год. Легендарная «копейка» ВАЗ-2101 была разработана на базе итальянского ФИАТ-124. С этого времени появилась слабая тенденция уменьшения острого дефицита советского рынка автомобилей. Пятиместная малолитражка ВАЗ-2101 снабжалась четырехцилиндровым двигателем с мощностью в 60 л.с. и развивала скорость до 140 км/час. Руководство СССР считало, что «Жигули» из-за низкой цены и массовости станут народным автомобилем. Но этого не произошло, так как цена росла при выпуске каждой новой модели. В 1977 году с конвейера завода сошла «Нива» — ВАЗ-2121, которая имела полный привод и могла с успехом преодолевать сельское бездорожье. При советской власти в Тольятти был разработан и выпущен ряд из 9-ти моделей, особой популярностью среди которых пользовались «копейка», 6-я и 9-я модели. «Девятка», как и 8-ая модель, впервые имела привод на передние колеса.

Производство «шестерки» ВАЗ-2106 было начато в 1976 году, за базовую модель был взят FIAT 124 Speciale. Внедорожник «Нива» ВАЗ-2121 из-за высокой цены не был распространен в СССР, но на ярмарке в Познани получил золотую медаль. Приз «Золотой Меркурий» завод получил в 1987 году за большой вклад в международное сотрудничество. В 1995 году стартовала сборка нового семейства автомобилей – ВАЗ 2110. Модель выпускалась в 4-х вариантах кузова – седан, универсал, хэтчбек и купе. В 1997-м публике представлен новый ВАЗ 2115 – рестайлинговая версия ВАЗ 21099. В ноябре 2004 года компания АвтоВАЗ начала выпуск принципиально новой модели Lada Kalina, которая по данным Ассоциации европейского бизнеса (2009 год) заняла 4-е место в рейтинге самых популярных автомобилей России. В 2007-м году модельный ряд компании пополнила Lada Priora – автомобиль, призванный полностью вытеснить с производства устаревшую «десятку». Весной 2008 года в списке основных акционеров российской автокомпании появилась фирма Renault, которая приобрела 25% акций АвтоВАЗ.

В 2009 году предприятие переживает кризис и несет огромные убытки. Финансовая поддержка от государства, а также программа субсидирования потребительских автокредитов оказали положительное влияние на сложившуюся ситуацию. Для спасения АвтоВАЗ также были предприняты решительные действия, в частности, крупные сокращения персонала.

В 2010-м году АвтоВАЗ впервые после кризиса выходит на прибыль. В октябре 2011 года на конвейере АвтоВАЗ стартовало производство Lada Granta — удешевленной версии Lada Kalina, призванной занять стартовую нишу в модельной линейке. В этом же году должность главного дизайнера российской компании получил Стив Маттин – именно ему удалось создать фирменный образ новых Lada Vesta и Lada XRAY. Усиливается партнерство АвтоВАЗ с альянсом Renault-Nissan – последнему с 2013 года принадлежит контрольный пакет акций российского предприятия. В 2013 году кресло главы АвтоВАЗ занимает Бу Андерссон, который до этого возглавлял ГАЗ. Этому человеку удалось запустить в серию две модели Vesta и XRAY, но, несмотря на положительные тенденции развития компании и оптимизацию работы завода АвтоВАЗ в 2014-2015 так и не сумел выйти на прибыль.

В 2016 году главой АвтоВАЗ стал директор российской Dacia Николя Мор. Согласно информации официального сайта АвтоВАЗ, приоритетами компании на будущее являются повышение эффективности производства, улучшение качества автомобилей и выход на операционную прибыль.

Самый зрелищный год. Чем запомнился 2021-й в спорте :: Другие :: РБК Спорт

Триумф США на Олимпиаде, Италии — на Евро, Канады — в хоккее, Норвегии — в биатлоне, России — в фигурном катании, а также бои Федора Емельяненко и Конора Макгрегора — в подборке самых заметных соревнований 2021 года от РБК

Читайте нас в

Новости Новости

Фото: Global Look Press

Олимпийские игры в Токио

Олимпиада в Токио была перенесена на год из-за коронавируса и прошла с 23 июля по 8 августа. Из-за положительного теста, взятого по приезде на Олимпиаду, ряд спортсменов так и не смогли выступить по причине пребывания на карантине.

Первое место в командном зачете заняла сборная США, на счету которой 113 медалей (39 золотых, 41 серебряная и 33 бронзовых). Также в тройку лучших команд вошли Китай (88 — 38, 32, 18) и Япония (58 — 27, 14, 17). Спортсмены из России завоевали 71 награду (20, 28, 23). В общем медальном зачете это позволило занять пятое место вслед за Великобританией.

Для россиян Игры запомнились в первую очередь скандалом в художественной гимнастике, где сборная впервые за 25 лет осталась без золота.

В индивидуальном многоборье победила израильтянка Линой Ашрам, обошедшая Дину и Арину Авериных, несмотря на потерю ленты. Российская сторона после соревнований заявляла о нечестном судействе, а также подавала протесты, которые ни к чему не привели. Тему судейства не раз затрагивал и Владимир Путин, который, в частности, потребовал от «счетоводов» показать оценки гимнасток на Олимпиаде.

Фото: Getty Images

Чемпионат Европы по футболу

Как и Олимпиаду, Евро-2020 отложили на год. По случаю 60-летия с момента первого континентального первенства чемпионат Европы впервые в истории прошел не на территории одного-двух государств, а сразу в 11 странах.

Турнир начался с инцидента в Копенгагене, который едва не стал трагедией. Лидер сборной Дании Кристиан Эриксен во время матча первого тура с Финляндией пережил остановку сердца. Он потерял сознание и упал. Медики реанимировали его прямо на поле. Футболиста доставили в больницу Копенгагена, где ему позднее установили кардиостимулятор. Сам матч был доигран на следующий день.

В турнире приняли участие 24 сборные, которые были поделены на шесть групп. Сборная России одержала победу над Финляндией, но уступила Бельгии и Дании и не смогла выйти в плей-офф.

Датчане после случившегося с Эриксеном сенсационно дошли до полуфинала, где уступили команде Англии (1:2). Победный мяч был забит в дополнительное время благодаря пенальти, который заработал Рахим Стерлинг. Голландский арбитр Данни Маккели увидел нарушение и после совещания с помощниками поставил мяч на 11-метровую отметку. В свою очередь, отвечавший за систему видеоповторов Пол Ван Букель не попросил судью пересмотреть момент, как это делается в спорных эпизодах. В итоге Гарри Кейн не реализовал пенальти, но поразил ворота на добивании. Этот гол стал победным для англичан. Эпизод вызвал множество споров после финального свистка.

Многие эксперты не согласились с судьей.

«Возмутительный нырок англичанина». Был ли пенальти в матче с Данией

В решающем матче в Лондоне встретились сборные Италии и Англии. Основное и дополнительное время завершилось со счетом 1:1. В серии пенальти точнее были итальянцы — 3:2. В составе англичан промахнулись три темнокожих игрока, которые подверглись оскорблениям на расовой почве.

Фото: Getty Images

Отборочный турнир к чемпионату мира в Катаре

Весной и осенью прошла групповая стадия квалификационного турнира среди европейских команд. Победителям групп гарантировано участие в финальной стадии мирового первенства. В ноябре следующего года в Катар отправятся сборные Сербии, Испании, Швейцарии, Франции, Бельгии, Дании, Нидерландов, Хорватии, Англии и Германии.

Наилучший результат показали Дания и Германия. Они набрали по 90% очков, одержав по девять побед в десяти встречах.

В марте в полуфинальных стыковых матчах встретятся Россия — Польша, Португалия — Турция, Швеция — Чехия, Уэльс — Австрия, Италия — Северная Македония, Шотландия — Украина.

Победители пар выйдут в финалы. Те, кто выиграет решающие матчи, отправятся на чемпионат мира. Россия в случае выигрыша у Польши попадет на победителя пары Швеция — Чехия.

И полуфинальные, и финальные противостояния будут состоять из одного матча.

Фото: Global Look Press

Чемпионат мира по хоккею

Сборная Канады начала турнир, проходивший в Риге, с трех поражений и вообще могла не выйти из группы. Но, усилив по ходу чемпионата мира состав, родоначальники хоккея все же вышли в плей-офф, а там одержали три победы подряд — над Россией, США и Финляндией.

Канадцы выиграли мировое первенство в 27-й раз. Они сравнялись по этому показателю со сборной СССР/России. Отечественная команда в 2021 году завершила выступление на стадии 1/4 финала, а в группе заняла первое место.

Фото: Global Look Press

Чемпионат мира по биатлону

Соревнования в словенской Поклюке завершились триумфом сборной Норвегии. Ее представители выиграли семь золотых медалей — больше, чем все остальные спортсмены вместе взятые (пять). Также в активе норвежцев три серебра и четыре бронзы.

Открытием всего биатлонного сезона и чемпионата мира стал дебютант мировых первенств Стурла Легрейд — 24-летний спортсмен завоевал четыре золота. У женщин блистала Тириль Экхофф (четыре золота, серебро и бронза).

Представители России разделили седьмое место в общем зачете с командами Белоруссии и Украины. Все три сборные выиграли по одной бронзе. Россияне финишировали третьими в мужской эстафете.

Фото: Getty Images

Чемпионат мира по фигурному катанию

Российские фигуристы в Стокгольме показали лучший результат, повторив рекорд чемпионатов мира 1998 и 1999 годов, — они завоевали шесть медалей из 12 возможных.

Впервые в истории мировых первенств весь пьедестал почета в женском одиночном катании заняли представительницы России — Анна Щербакова (золото), Елизавета Туктамышева (серебро) и Александра Трусова (бронза).

В соревнованиях спортивных пар и в танцах на льду также первенствовали россияне Анастасия Мишина и Александр Галлямов, Виктория Синицина и Никита Кацалапов. У мужчин чемпионом стал американец Нейтан Чен.

Бой Емельяненко — Джонсон

В октябре Федор Емельяненко провел первый с декабря 2019 года поединок. В главном бою турнира Bellator 269 в Москве россиянин встретился с американцем Тимоти Джонсоном, который тогда занимал вторую строчку в рейтинге тяжеловесов промоушена.

Поединок продлился менее двух минут. Емельяненко победил соперника нокаутом.

Фото: ТАСС

Дисквалификация и новая победа Яна

В марте Петр Ян проводил бой в UFC против Алджамейна Стерлинга. В четвертом раунде россиянин применил запрещенный прием и его дисквалифицировали. Ян лишился чемпионского пояса.

На конец октября была запланирована новая встреча Яна и Стерлинга. Но американец не смог выйти на бой из-за проблем со здоровьем. В итоге соперником российского бойца стал другой представитель США Кори Сэндхаген.

Ян победил и завоевал временный титул чемпиона UFC в легчайшем весе.

Фото: Getty Images

Два поражения Макгрегора

В июне 2020 года Конор Макгрегор в третий раз объявил о завершении карьеры. Но в январе и июле следующего года ирландский боец смешанного стиля провел бои с американцем Дастином Порье. Ранее обоих побеждал россиянин Хабиб Нурмагомедов.

В первом поединке победу техническим нокаутом одержал Порье. Макгрегор захотел реванша, но по ходу боя сломал левую ногу.

Фото: Getty Images

Одно из самых зрелищных спортивных событий произошло в боксе. Британец Тайсон Фьюри одержал победу над американцем Деонтеем Уайлдером. Бой прошел в Лас-Вегасе и завершился нокаутом Уайлдера в 11-м раунде.

В конце третьего раунда Фьюри отправил соперника в нокдаун. Бой был близок к завершению, но Уайлдер смог достоять до перерыва. Однако в четвертом раунде ситуация перевернулась — в нокдауне уже оказался британец. Причем он дважды побывал на настиле: во второй раз — после запрещенного удара соперника по затылку, поэтому нокдаун не был засчитан.

С шестого раунда на ринге доминировал Фьюри. В перерывах судья дважды подзывал врача для определения состояния Уайлдера, который в десятом раунде во второй раз за бой был послан в нокдаун.

В 2022 году Фьюри может встретиться с украинцем Александром Усиком, который стремительно ворвался в тяжелый вес и отобрал титулы по трем престижным категориям у Энтони Джошуа. На кону боя стояли принадлежащие Джошуа чемпионские титулы по версиям Всемирной боксерской ассоциации (WBA, с приставкой «супер»), Всемирной боксерской организации (WBO), Международной боксерской федерации (IBF) и Международной боксерской организации (IBO) в супертяжелом весе.

Три боя понадобилось Усику, чтобы стать самым титулованным действующим боксером в тяжелом весе. 12-раундовый поединок с Джошуа завершился победой украинца единогласным решением судей — 117:112, 116:112, 115:113. При этом Усик был на 8 кг легче соперника.

Самый интригующий сезон в истории «Формулы-1»

Второй раз в истории проведения серии претенденты в борьбе за чемпионство подошли к финальной гонке сезона с одинаковым количеством очков. Британец Льюис Хэмилтон (Merсedes) и голландец Макс Ферстаппен (Red Bull) набрали по 369,5 очка.

Хэмилтон и Ферстаппен в прошедшем сезоне в каждой гонке демонстрировали бескомпромиссную борьбу, не раз сталкиваясь друг с другом. На Гран-при Великобритании Хэмилтон в повороте выбил с трассы лидировавшего Ферстаппена, который на скорости 300 км/ч влетел в шинное ограждение. В результате голландец был госпитализирован во время гонки. В то же время британец выиграл домашнюю гонку и избежал санкций.

На Гран-при Италии после столкновения сошли оба гонщика. Инцидент произошел на 26-м круге гонки. Хэмилтон выезжал с пит-стопа и боролся с Ферстаппеном за позицию, на повороте голландец наехал на бордюр, и его болид подбросило прямо на машину британца. В итоге оба пилота выехали за пределы трассы и застряли в гравии. Никто из гонщиков не пострадал. После гонки пилоты обвиняли друг друга в этом столкновении, но именно Ферстаппен был оштрафован потерей трех мест на старте следующего этапа чемпионата — Гран-при России.

В предпоследней гонке сезона, прошедшей в Саудовской Аравии, вновь был наказан Ферстаппен — на этот раз штрафными секундами. Британец врезался в конкурента из-за резкого снижения скорости соперником. Это произошло после неудачной попытки Ферстаппена отбиться от атаки Хэмилтона. В ходе маневра голландец срезал круг, что запрещено правилами. В Red Bull приказали своему гонщику пропустить соперника вперед. Этим и было вызвано резкое снижение скорости, но Хэмилтон не ожидал такого решения и не смог избежать аварии. В результате британец финишировал первым, голландец — вторым.

Последняя гонка прошла под стать всему сезону. Хэмилтон вырвался вперед на первом круге после среза. По ходу гонки Хэмилтон еще за семь кругов до финиша уверенно лидировал, опережая Ферстаппена более чем на десять секунд, но утратил преимущество из-за появления на трассе машины безопасности в связи с аварией Николаса Латифи из Williams.

Ферстаппен успел заехать на пит-стоп, а рестарт гонки случился на последнем круге, на котором голландец благодаря более свежим шинам легко обогнал Хэмилтона.

Таким образом, Ферстаппен победил в гонке и стал чемпионом мира. Хэмилтон, который непрерывно побеждал с 2017 года, занял второе место.

Mercedes подал два протеста на итог гонки, но Международная автомобильная федерация (FIA) их отклонила. Хэмилтон позднее заявил о манипуляциях в гонке Гран-при Абу-Даби.

Биологические перспективы pH-зонда на основе FRET, демонстрирующего работу молекулярного логического вентиля при изменении pH

Мониторинг внутриклеточного pH — мощный инструмент для понимания множества клеточных функций и прогноза многих заболеваний. В этом исследовании был приготовлен эффективный многофункциональный кислый pH-чувствительный зонд 1 , основанный на резонансном переносе энергии флуоресценции (FRET) посредством связывания родамина B в качестве акцептора FRET и нафталимидного флуорофора в качестве донора FRET с использованием 1 , 4-диаминобутан в качестве неконъюгированного линкера. Морфолин был добавлен в качестве потенциальной целевой группы для лизосом к нафталимидному фрагменту. Зонд имеет селективное переключение излучения с зеленого на красный в диапазоне pH от нейтрального до кислого (от pH 7,0 до pH 4,0), тогда как он, по-видимому, остается неизменным в основной среде с наблюдаемым p K _a ∼4,80. Кроме того, зонд 1 может быть использован для создания логического элемента INHIBIT и соответствующей дополнительной логической схемы, применяя ионы H ⁺ и OH ^— в качестве входных сигналов на основе спектральных изменений поглощения и излучения, соответственно.Зонд показал эффективную склонность к связыванию с CT-ДНК ( K _b = 1,34 × 10 ⁵ M ^-1 ), что свидетельствует о частичной интеркаляции через плоские фрагменты между парами оснований ДНК. Он также показал сильную аффинность связывания с белком бычьего сывороточного альбумина (BSA) ( K _BSA = 1,74 × 10 ⁶ M ^-1 ) с эффективным гашением флуоресценции триптофана (97%). при λ _em = 345 нм.Интересно отметить, что нафталимидный флуорофор, являющийся эффективным фотосенсибилизатором, позволяет зонду демонстрировать эффективное фоторасщепление ДНК под действием УФ-А света ( λ = 312 нм) с 65% -ной конверсией сверхспиральной (SC) ДНК в ее кольцевую (NC) форму ДНК с разрывами . через фотогенерация активных форм кислорода (АФК) в микромолярной концентрации в физиологических условиях.

У вас есть доступ к этой статье

Подождите, пока мы загрузим ваш контент… Что-то пошло не так. Попробуй снова?

Предполагаемые свойства неупорядоченных цепей на основе эффективности переноса FRET: Журнал химической физики: Том 148, № 12

Фёрстеровский резонансный перенос энергии (FRET) — мощный инструмент для выяснения как структурных, так и динамических свойств развернутых или неупорядоченных биомолекул, особенно в одномолекулярные эксперименты.Однако ключевые наблюдаемые параметры, а именно средняя эффективность переноса и время жизни флуоресценции донорных и акцепторных хромофоров, усредняются по широкому распределению донорно-акцепторных расстояний. Таким образом, предполагаемые средние свойства ансамбля зависят от формы распределения модели, выбранной для описания расстояния, как это широко признано. Кроме того, хотя распределение для одного типа полимерной модели может быть подходящим для цепи при заданном наборе физико-химических условий, оно может не подходить для той же цепи в другой среде, так что даже очевидно последовательное применение Одна и та же модель во всех условиях может искажать видимые изменения размеров цепи при изменении температуры или состава раствора. Здесь мы представляем альтернативный и простой подход к определению свойств ансамбля на основе данных FRET, в котором масштабный показатель полимера может изменяться в зависимости от условий раствора. В своей простейшей форме он требует либо средней эффективности FRET, либо информации о времени жизни флуоресценции. Чтобы проверить точность метода, мы использовали как синтетические данные FRET из неявного и явного моделирования растворителей для 30 различных белковых последовательностей, так и экспериментальные данные FRET одиночных молекул для изначально неупорядоченного и денатурированного белка.Во всех случаях мы обнаруживаем, что предполагаемые радиусы вращения находятся в пределах 10% от истинных значений, что обеспечивает более высокую точность, чем более простые полимерные модели. Кроме того, показатели масштабирования, полученные по нашей методике, хорошо согласуются с показателями, определенными непосредственно из молекулярного ансамбля. Наш подход в принципе может быть обобщен на рассмотрение других усредненных по ансамблю функций внутримолекулярных расстояний из экспериментальных данных.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим Андреа Соранно за многие содержательные обсуждения.R.B. и W.Z. были поддержаны программой очных исследований Национального института диабета, болезней органов пищеварения и почек Национального института здоровья. В этой работе использовались вычислительные ресурсы кластера NIH HPC Biowulf (http://hpc.nih.gov). Б.С. был поддержан Швейцарским национальным научным фондом. Исследование, представленное в этой публикации, было частично поддержано NIGMS R01GM118530. Использование высокопроизводительных вычислительных возможностей среды Extreme Science and Engineering Discovery Environment (XSEDE), которая поддерживается Национальным научным фондом, проект No.TG-MCB120014, также выражаем признательность.

Gibson 2018 L-00 12 Fret Электро-акустическая гитара Rosewood Burst

1-2c&cb=3″> { «pageType»: «item_page», «placements»: «3», «PlacementNames»: «rr1, rr2, OOS2» }

{ «slidesToShow»: 6, «slidesToScroll»: 6, «бесконечный»: ложь, «точки»: правда, «lazyLoad»: «ondemand», «pauseOnHover»: правда, «стрелки»: ложь, «centerMode»: ложь, «отзывчивый»: [ {«breakpoint»: 1024, «settings»: {«slidesToShow»: 5, «slidesToScroll»: 5}}, {«breakpoint»: 768, «settings»: {«slidesToShow»: 4, «slidesToScroll»: 4}}, {«точка останова»: 640, «настройки»: {«slidesToShow»: 2, «slidesToScroll»: 2}} ] }

ложь ложь

К сожалению, этот товар недоступен.
Свяжитесь с нашими экспертами, чтобы порекомендовать отличные альтернативы. Позвоните нам по телефону 800-449-9128.

{«id»: «K45456», «categoryId»: «site1ABA, site1ABN», «pageName»: «2018 L-00 12 Fret Acoustic-Electric Guitar», «pageUrl»: «/ guitars / gibson-2018-l-00-12-лад-акустическая-электрогитара», «thumbnailUrl»: «», «addToCartUrl»: «/ гитары / gibson-2018-l-00-12-лад-акустическая-электрогитара», «hasFeatures»: «0», «isAccessory»: «0», «message»: «Gibson L-00 12 Fret 2018 L-00 12 Fret отличается аутентичностью верха из массивной ели ситка, подкладками из термоклея, а также спиной и боковинами из массива палисандра.он обеспечивает мощное исполнение с аутентичным тоном и громкостью. L-00 12 Fret 2018 имеет классическую отделку Antique Natural, выдающийся пример оригинальных взрывов той эпохи. Эта гитара включает 1.75 & # 34; ширина порожка и отчетливый V-образный профиль шейки воссоздают классическое ощущение при игре с плоской стороны или пальцами. «, «value»: «1,967.20», «priceMin»: «1 967,20», «priceMax»: «2,459.00», «priceSavingsMaxPrice»: «0. 00″, «priceSavingsMaxPercent»: «0», «inventory»: «0», «бренд»: «Гибсон», «reviewStarImageUrl»: «https: // static.musiciansfriend.com/img/brand/mf/cmn/Sprit-Sm-Stars.png «, «reviewStarRating»: «5.0», «reviewStarRatingInteger»: «10», «reviewHowManyReviews»: «3», «usedOrNew»: «новый», «снято с производства»: «1», «onOrder»: «0», «оформление»: «0», «canBeSold»: «0», «accessoryCategories»: «site1LAAB, site1LFMID», «stickerText»: «»} Обзор { «slidesToShow»: 1, «бесконечный»: правда, «стрелки»: ложь, «точки»: правда, «lazyload»: «по требованию», «скорость»: 300, «mobileFirst»: правда, «салфетки»: правда }

Gibson 2018 L-00 Акустико-электрогитара 12 лада

Gibson L-00 12 Fret 2018 года акустико-электрическая отличается аутентичностью цельной верхней части из ели ситка, верхней распоркой из горячего клея, а также спиной и боковинами из массива розового дерева.он обеспечивает мощное исполнение с аутентичным тоном и громкостью. L-00 12 Fret 2018 имеет классическую отделку Antique Natural, выдающийся пример оригинальных взрывов той эпохи. Эта гитара включает в себя гайку шириной 1,75 дюйма и отчетливый гриф с V-образным профилем, воссоздающий классическое ощущение игры на плоской поверхности или при игре пальцами.

• Комплект шейного шарнира
• Перламутровые вставки 1/4 дюйма
• Анкерный стержень простого действия
• Прямоугольный мост с закрытыми пазами
• Стандартные лады

Закажите эту грету Гибсон сегодня.

Технические характеристики Кузов

• Тип кузова: Салон
• В разрезе: №
• Древесина столешницы: Ситкинская ель
• Спинка и боковые стороны: Палисандр
• Узор крепления: Традиционный зубчатый венец X
• Отделка корпуса: Нитроцеллюлозный лак
• Ориентация: вправо передано

Гриф

• Форма шеи: V
• Ширина верхнего порожка: 1,75 дюйма (44,45 мм)
• Гриф: палисандр
• Дерево грифа: красное дерево
• Длина шкалы: 24. 75 дюймов
• Количество ладов: 18
• Отделка грифа: Нитроцеллюлозный лак

Электроника

• Звукосниматель / предусилитель: Да
• Марка: L.R. Baggs
• Конфигурация: предусилитель, установленный на звуковой канал
• Эквалайзер предусилителя: 2-полосный
• Фильтр обратной связи: фаза
• Тюнер: Нет

Другое

• Накладка на переднюю бабку: Не указано
• Тюнинговые машины: Grover Gold Open Back
• Бридж: Не указано
• Седло и гайка: Tusq
• Количество струн: 6
• Особенности: Нет
• Корпус: Жесткий чехол
• Аксессуары: Нет
• Страна происхождения: США

{ «api_key»: «fee5c893-11c4-4cc8-b419-02f8d404de16», «locale»: «en_US», «merchant_group_id»: «15229», «merchant_id»: «815274», «page_id»: «K45456», «review_wrapper_url»: «https: // www.musiciansfriend.com/write-review/pdp?pr_page_id=___PAGE_ID___ «, «ENABLE_CONTENT_COLLECTION_MODAL»: ложь, «REVIEW_DISPLAY_LIST_TYPE»: «КОНДЕНСИРОВАННЫЕ», «REVIEW_DISPLAY_PAGINATION_TYPE»: «ВЕРТИКАЛЬНО», «style_sheet»: «https://static. musICALfriend.com/cmn/brand/mf/productionCss/powerReviewsOverride.r.css?vId=ecmd-2021.10.1-2c&cb=3″, «компоненты»: { «ReviewDisplay»: «pr_review-display» } }

{ «slidesToShow»: 6, «slidesToScroll»: 6, «бесконечный»: ложь, «точки»: правда, «lazyLoad»: «ondemand», «pauseOnHover»: правда, «стрелки»: ложь, «centerMode»: ложь, «отзывчивый»: [ {«breakpoint»: 1024, «settings»: {«slidesToShow»: 5, «slidesToScroll»: 5}}, {«breakpoint»: 768, «settings»: {«slidesToShow»: 4, «slidesToScroll»: 4}}, {«точка останова»: 640, «настройки»: {«slidesToShow»: 2, «slidesToScroll»: 2}} ] }

Магазин с другом

Бесплатная доставка

• Бесплатная стандартная наземная доставка (48 смежных штатов, исключая некоторые излишки веса и бывшие в употреблении / винтажные товары).
• Заказы размещены до 15:00. ET обычно отправляют в тот же рабочий день.

Выучить больше 2 года бесплатной гарантии на гитары

На каждую приобретенную вами у Musician’s Friend гитару или бас-гитару (электрическую или акустическую, New или Open Box) предоставляется двухлетняя защита от дефектов производителя.

Свяжитесь с нами для получения подробной информации Мы здесь для вас

Наши консультанты по снаряжению готовы помочь вам на протяжении всего процесса покупок. Позвоните или поговорите в чате, чтобы получить консультацию специалиста и узнать о последних предложениях.

Связаться с нами

Наши консультанты по снаряжению готовы помочь.

Наш контактный центр в настоящее время закрыт.

Запросить обратный звонок Чат поддержки проактивного советника

Наши консультанты по снаряжению готовы помочь.

Начать Ищете что-нибудь еще? Найдите ответы в нашем Справочном центре

{«product»: {«rep_id»: «site1prodK45456», «sku_rep_id»: «site1skuK45456000001000», «download»: false, «price»: «0.00», «контрольная сумма»: «- 2932544277300», «sku_id»: » K45456000001000 «,» stock «:» outofstock «},» dept «:» Гитары «,» category «:» Акустические гитары «,» subcategory «:» 6-струнные акустические гитары «,» pageName «:» product_detail «}

Динамическая структурная биология на основе FRET: проблемы, перспективы и призыв к практикам открытой науки

Понимание того, как биомолекулы соединяют структурную динамику с функцией, лежит в основе нескольких дисциплин и остается выдающейся целью биологии. Связывание конформационных состояний и их переходов с биохимической функцией требует способности точно определять структуру и динамику биологической системы, которая часто изменяется при связывании лиганда или находится под влиянием химических и физических свойств окружающей среды. Наиболее хорошо зарекомендовавшие себя инструменты структурной биологии предоставили с высоким разрешением «снимки» состояний в кристаллизованной или замороженной форме (например, рентгеновская кристаллография и криоэлектронная микроскопия одиночных частиц, криоЭМ) или усреднение по ансамблю всех способствующих конформаций. (е.g., ядерный магнитный резонанс, ЯМР; малоугловое рассеяние рентгеновских лучей, МУРР; малоугловое рассеяние нейтронов, МУРН; двойной электронно-электронный резонанс, DEER; поперечно-сшивающая масс-спектрометрия, XL-MS; ансамбль-FRET). В последние годы дальнейшие разработки позволили этим традиционным структурным инструментам обнаруживать конформационную динамику и промежуточные продукты реакции. Например, методы ЯМР (Anthis and Clore, 2015; Clore and Iwahara, 2009; Palmer, 2004; Ravera et al., 2014; Sekhar and Kay, 2019) и методы электронного парамагнитного резонанса (Jeschke, 2018; Jeschke, 2012; Krstić). и другие., 2011) были продвинуты для изучения конформационной динамики и захвата временных промежуточных соединений. Кристаллографические исследования с временным разрешением использовались для определения функционально значимых структурных смещений, связанных с биологической функцией (Kupitz et al., 2014; Moffat, 2001; Schlichting et al., 1990; Schlichting and Chu, 2000; Schotte et al., 2003). ). Достижения в микрожидкостных устройствах для смешивания и распыления позволили использовать криоЭМ с временным разрешением (Feng et al., 2017; Kaledhonkar et al., 2018) и масс-спектрометрию с поперечными связями (XL-MS или CL-MS) (Braitbard et al., 2019; Brodie et al., 2019; Чен и др., 2020; Якобуччи и др., 2019; Мураками и др., 2013; Славин, Калисман, 2018). Прогресс в вычислительных методах также предоставил новые инструменты для изучения биомолекулярной структуры и динамики. Каждое из этих достижений подчеркивает возросшее понимание того, что необходимо напрямую и непрерывно отслеживать динамические свойства отдельных биомолекул, чтобы понять их функцию и регуляцию.

В этом контексте FRET (называемый резонансным переносом энергии флуоресценции или резонансным переносом энергии Фёрстера [Braslavsky et al., 2008]) исследования на ансамблевом и одномолекулярном уровнях стали важными инструментами для измерения структурной динамики по крайней мере на 12 порядков во времени и картирования конформационных и функциональных неоднородностей биомолекул в условиях окружающей среды. Исследования FRET, исследующие затухание флуоресценции на уровне ансамбля (Grinvald et al., 1972; Haas et al., 1975; Haas, Steinberg, 1984; Hochstrasser et al., 1992) (FRET с временным разрешением) позволили уже в начале 1970-х годов исследование структурных неоднородностей на временах, превышающих время жизни флуоресценции (несколько нс).Этот подход используется до сих пор (Becker, 2019; Orevi et al. , 2014; Peulen et al., 2017) и перенесен в исследования одиночных молекул. Возможность измерения FRET в отдельных молекулах (Deniz et al., 1999; Ha et al., 1996; Lerner et al., 2018a) сделала этот метод еще более привлекательным. Одномолекулярный FRET (smFRET) широко используется для изучения конформационной динамики и биомолекулярных взаимодействий в стационарных условиях (Dupuis et al., 2014; Larsen et al., 2019; Lerner et al., 2018а; Lipman et al., 2003; Маргиттай и др., 2003; Мазал и Аран, 2019; Michalet et al., 2006; Ореви и др., 2014; Ray et al., 2019; Sasmal et al., 2016; Schuler et al., 2005; Schuler et al., 2002; Steiner et al., 2008; Zhuang et al., 2000). Примечательно, что во многих механистических исследованиях достаточно использовать FRET для различения различных конформаций и определения кинетических скоростей, так что абсолютные эффективности FRET и, следовательно, расстояния не нужно определять. Однако возможность точного измерения расстояний и кинетики с помощью smFRET привела к его появлению в качестве важного инструмента в эту новую эру « динамической структурной биологии » для картирования биомолекулярных неоднородностей и для измерения структурной динамики в широком диапазоне временных масштабов (Lerner и другие. , 2018а; Мазал и Аран, 2019; Санабрия и др., 2020; Шулер и Хофманн, 2013; Weiss, 1999).

Одномолекулярный FRET (smFRET) имеет много преимуществ в качестве метода структурной биологии, в том числе:

• чувствительность к макромолекулярным расстояниям (2,5–10 нм),

• способность разрешать структурные и динамические неоднородности,

• высококачественные измерения с низким потреблением образца интересующих молекул (низкие концентрации и малые объемы), поскольку образец анализируется по одной молекуле за раз,

• определение структурных переходов в состоянии равновесия без необходимости синхронизации,

• возможность обнаружения (очень) редких событий.В самом деле, в биологии наиболее интересными для изучения молекулы часто являются редкие, функционально активные молекулы среди моря неактивных молекул.

• высокая чувствительность и специфичность для меченых молекул. Поскольку только меченая молекула вносит уникальный вклад в детектируемый сигнал, эти индикаторы также могут применяться в качестве FRET-репортеров в тесноте (Dupuis et al., 2014; Soranno et al., 2014; Zosel et al., 2020b) (отсюда smFRET может использоваться для проверки результатов, полученных изолированно, или обнаружения модуляции конформационных предпочтений и / или структурной динамики посредством так называемых пяти взаимодействий [Guin and Gruebele, 2019]), и

• высокая специфичность для остатков / доменов за счет специфической маркировки.Биомолекулы могут быть специально помечены уникальной парой красителей, что позволяет проводить измерения smFRET для всех размеров молекул, включая большие сложные сборки (см. Рисунок 1 [Kilic et al., 2018]), активные биологические машины (например, рибосомы) ( Dunkle et al., 2011) и даже на целых нативных вирионах (Lu et al., 2019; Munro et al., 2014).

Рабочий процесс моделирования динамических структур по измерениям FRET.

( A ) Интеграционное моделирование требует структурной и динамической информации. Предварительная информация из традиционных подходов (рентген, ЯМР, криоЭМ) вместе с вычислительными инструментами определяет пространство возможных решений для структурного моделирования с помощью FRET. Комбинация структурной (расстояния между красителями) и динамической информации (кинетическая связь и обменные курсы) позволяет идентифицировать непротиворечивую модель. ( B ) Изучение структуры и динамики хроматиновых волокон.Комбинированное TIRF и конфокальное FRET исследование структуры и динамики хроматиновых волокон с использованием трех позиций маркировки FRET (DA1-3) для двух пар красителей с различными расстояниями Ферстера. Расстояния Фёрстера (определены в разделе Расстояния между красителями, уравнение 6). Предварительная структурная информация, полученная с помощью криоэлектронной микроскопии (вверху слева) (Song et al., 2014) и рентгеновской кристаллографии (вверху, справа PDB ID: 1ZBB Schalch et al. , 2005), объединена со структурной и динамической информацией. полученные в результате экспериментов FRET на иммобилизованных молекулах, измеренных с помощью микроскопии полного внутреннего отражения (TIRF), и на свободно диффундирующих молекулах с помощью конфокальной микроскопии (Kilic et al., 2018). На основе объединенной информации получена согласованная модель конформаций хроматиновых волокон со смещенными регистрами, которые связаны медленными (> 100 мс) и быстрыми процессами декомпакции (150 мкс), которые протекают не напрямую, а скорее через открытое волокно. конформация. Рисунок 1B был воспроизведен с рисунков 1, 3 и 6 в Kilic et al., 2018, Nature Communications с разрешения, опубликованном под Международной общественной лицензией Creative Commons Attribution 4.0 (CC BY 4.0; https: // creativecommons.org / licenses / by / 4.0 /).

© 2018, Kilic et al. Панель B была воспроизведена с рисунков 1, 3 и 6 в Kilic et al., 2018, с разрешения, опубликованном под Международной общественной лицензией Creative Commons Attribution 4. 0.

Несколько методов были использованы для определения структурных ансамблей, таких как ЯМР, одночастичная криоЭМ или XL-MS, а недавно также smFRET в интегративном / гибридном (I / H) подходе с компьютерным моделированием для преодоления разреженности экспериментальных данных. относительно атомистического описания (Берман и др., 2019; де Соуза и Пикотти, 2020; Димура и др., 2020; Gauto et al., 2019; Кукос и Бонвин, 2020; На и Пэк, 2020; Тан и Гонг, 2020; Webb et al., 2018). Структурные модели I / H, полученные из экспериментов smFRET с использованием расстояний между красителями в качестве ограничений, были описаны для гибких свернутых белков (Brunger et al., 2011; Hellenkamp et al., 2017; Margittai et al., 2003; McCann et al., 2012). ), конформационные ансамбли неупорядоченных / неструктурированных и развернутых белков (Borgia et al., 2018; Holmstrom et al., 2018; Schuler et al., 2020), нуклеиновые кислоты и комплексы белок-нуклеиновая кислота (Craggs et al. , 2019; Craggs, Kapanidis, 2012; Kalinin et al., 2012; Lerner et al., 2018b; Muschielok et al., 2008). ; Возняк и др., 2008).

Еще одним уникальным аспектом исследований smFRET является то, что структурная, кинетическая и спектроскопическая информация о больших и сложных системах может быть записана одновременно в одном измерении. Это способствует объединению динамической и структурной информации в интегративный подход к (рис. 1A) (Hellenkamp et al., 2017; Килич и др., 2018; Ли и др., 2020b; Санабрия и др., 2020; Вассерман и др., 2016; Янез Ороско и др., 2018):

.

• определить количество возможных структур, согласующихся с данными,

• потенциально уменьшить неоднозначность между различными структурными моделями, совместимыми с экспериментальными данными, а

• раскрывают структурно разрешенные динамические пути обмена.

В качестве примера на рисунке 1B показаны результаты мультимодального исследования smFRET конформационного ландшафта 12-мерного массива хроматина (~ 2. 5 MDa) (Kilic et al., 2018) с динамикой, происходящей во временных масштабах от наносекунд до часов. SmFRET эксперименты могут обнаруживать гибкие конформации хроматина (рис. 1B, средняя панель), показывая их динамическую структурную неоднородность (рис. 1B, нижняя панель), в отличие от хорошо упорядоченных статических структур хроматиновых волокон (рис. 1B, верхняя панель). Эти гибкие, частично открытые и открытые конформации, которые довольно многочисленны в растворе (популяция> 70%; рис. 1B, нижняя панель), не были разрешены ранее, хотя они необходимы для правильной организации и функции гена.Они представляют собой центральный узел взаимопревращений для отдельных регистров стэкинга хроматина и их трудно обнаружить с помощью других структурных методов. Такой подход к визуализации биомолекул в действии в условиях окружающей среды подчеркивает важность их динамической природы, разрешая переходы между различными конформационными состояниями, что во многих случаях способствует их функции (Aviram et al. , 2018; Henzler-Wildman et al., 2007; Iljina et al., 2020; Lerner et al., 2018b; Sanabria et al., 2020; Tassis et al., 2020).

Измерения

SmFRET обычно выполняются с использованием двух подходов: с использованием иммобилизованных на поверхности молекул с использованием флуоресцентной микроскопии полного внутреннего отражения (TIRFM) и обнаружения на основе камеры или со свободно диффундирующими молекулами в растворе с использованием конфокальной микроскопии и точечных детекторов. Экспериментальные системы имеются в продаже, но обычно их изготавливают самостоятельно. Образцы подготавливаются, а данные собираются с использованием протоколов для конкретных лабораторий, где данные хранятся в различных форматах файлов и анализируются с использованием набора все более мощного программного обеспечения.Для области в целом и для структурных исследований в частности важно продемонстрировать, что smFRET как метод воспроизводим и надежен независимо от того, где и как измеряется образец. С этой целью под руководством Торстена Хугеля двадцать лабораторий объединились для измерения smFRET на нескольких конструкциях дцДНК (Hellenkamp et al. , 2018a). Изучая шесть различных образцов с разными красителями и различными расстояниями между красителями, средняя эффективность FRET, полученная участвующими лабораториями, показала удивительно высокую степень согласия (ΔE между 0.02 и 0,05 в зависимости от деталей образца). Количественная оценка и воспроизводимость измерений smFRET на основе интенсивности и обсуждение анализа данных стали важной вехой. Эти стандарты дцДНК FRET теперь доступны для ежедневной калибровки и особенно полезны для новых групп, присоединяющихся к сообществу.

Вдохновленный идеями, полученными в ходе вышеупомянутой попытки FRET (Hellenkamp et al., 2018a), были начаты новые многолабораторные слепые исследования.Следующее сравнительное исследование FRET, проведенное Thorben Cordes, исследует надежность и надежность экспериментов smFRET на белках, претерпевающих лиганд-индуцированные конформационные изменения (Gebhardt et al., В стадии подготовки). В этом исследовании используются два различных модельных белка для оценки воспроизводимости и точности smFRET на основе белков для измерения расстояния между красителями. Белковые системы ставят новые задачи, включая статистическую маркировку красителей, специфические для сайта свойства красителей, стабильность белков, транспортировку, хранение и конформационную динамику.Следовательно, в исследовании также оценивается способность smFRET обнаруживать и количественно оценивать динамику в различных временных масштабах от микросекунд до секунд. Еще одна задача FRET, инициированная Соней Шмид, — это программа kinSoftChallenge (http://www.kinsoftchallenge.com, Götz et al., В стадии подготовки), которая оценивает существующие инструменты для извлечения кинетической информации из временных траекторий одиночных молекул. Эта задача направлена ​​на: (1) продемонстрировать способность кинетического анализа на основе smFRET точно выводить динамическую информацию и (2) предоставить сообществу средства оценки различных доступных программных инструментов.

Одним из важных результатов различных исследований FRET в нескольких лабораториях было то, что, хотя согласие было хорошим, его можно было улучшить еще больше. В частности, анализ данных и, в частности, исправления могут повлиять на определенную эффективность FRET и результирующие расстояния. Следовательно, открытое обсуждение того, какие подходы работают наиболее надежно, при каких условиях необходимо. Доступ к первичным данным и возможность их обработки с помощью различных подходов к анализу были и останутся наиболее прозрачным способом продвижения вперед в этой области.В настоящее время это сложно, учитывая множество вариантов используемых методов, их документации, форматов файлов и экспериментальных процедур, применяемых в разных лабораториях, для установления оптимальных условий, рабочего процесса и передовых практик даже для существующих, хорошо протестированных методов, поскольку сравнение этих методов затруднительно. требует много времени, а необходимая информация во многих случаях недоступна. С расширением открытых научных практик и представлением опубликованных данных в репозитории необходим консенсус в отношении того, какие данные и метаданные следует хранить и в каких возможных форматах, чтобы их могло легко использовать сообщество.

В связи с этими соображениями и множеством возможностей для роста сообщества smFRET, несколько лабораторий, обладающих опытом в FRET, без претензии на исчерпывающий или исключительный характер, собрались, чтобы поддержать эти усилия и предложить шаги по организации сообщества вокруг последовательной и открытой науки. практики. Это действие переводится в общие методологические рекомендации или предложения, которые мы представляем после типичного рабочего процесса эксперимента smFRET, включая подготовку и определение характеристик образцов, описание установки, сбор и сохранение данных, а также анализ данных.Эти рекомендации о том, как «практиковать» smFRET, являются не попыткой систематизировать сообщество, а скорее первоначальным предложением, которое направлено на поощрение открытого диалога о существующих практиках в нашей области и приводит к более высокой воспроизводимости результатов экспериментов smFRET. Затем мы обсуждаем практику открытой науки, а также первые шаги, которые были предприняты для формирования международного сообщества FRET. В заключение мы выделим несколько областей, в которых smFRET окажет большое влияние на различные области науки в ближайшем будущем.

работников отеля обеспокоены новым соперником: Алекса на стойке регистрации

Боссы еще не внедрили технологию распознавания лиц в отеле Royal Hawaiian. Но со своего места за стойкой регистрации в розовом неомавританском дворце с видом на пляж Вайкики Жан Тео-Гибни может предвидеть это.

«Marriott только что представила это в Китае», что позволяет гостям регистрироваться в своих комнатах, не утруждая себя формальностями на стойке регистрации, — сказала г-жа Тео-Гибни, 53-летняя семилетняя бабушка.«Похоже, они знают, что сократят наши рабочие места».

Подобные опасения витают в обширной сети отелей Marriott, крупнейшей в США. За последние две недели г-жа Тео-Гибни и тысячи других работников Marriott — повара и кассиры, посыльные и горничные — проголосовали за то, чтобы разрешить своему профсоюзу Unite Here провести забастовку в десятках населенных пунктов от Вайкики до Бостона и Сан-Франциско. Диего в Детройт.

Наряду с обычными требованиями повышения заработной платы и повышения безопасности на рабочем месте, профсоюз поднимает еще одну проблему, требуя процедур для защиты рабочих, затронутых новыми технологиями и инновациями, которые они стимулируют.

«Вы не собираетесь останавливать технологии», — сказал президент Unite Here Д. Тейлор. «Вопрос в том, будут ли сотрудники сотрудничать с ним в развертывании или случайные прохожие, которых он сбивает».

В отличие от производственных рабочих, рабочие места которых были потеряны из-за автоматизации еще в 1950-х годах, работники низкооплачиваемой части сектора услуг до сих пор в значительной степени защищены от технологий, сокращающих рабочие места.

Многие заработали слишком мало, чтобы оправдать большие капитальные затраты на их замену.Согласно правительственным данным, типичный клерк в отеле или мотеле зарабатывает чуть более 12 долларов в час; консьерж чуть больше 13,50 долларов. И многие из выполняемых ими задач казались слишком сложными для автоматизации. Технологии меняют этот расчет.

Не существует эквивалентной меры по проникновению программных систем, таких как Alexa или сенсорных экранов, на рабочие места. Но в 2014 году автопроизводители в США имели 117 роботов на каждую 1000 рабочих, согласно исследованиям экономистов Дарона Асемоглу из Массачусетского технологического института и Паскуаля Рестрепо из Бостонского университета.В сфере услуг их практически не было.

Но с развитием машинного обучения и других инноваций в области информационных технологий многие рабочие места в сфере обслуживания теперь потенциально находятся под угрозой. По сравнению с производством, инвестиции, необходимые для автоматизации некоторых задач в гостиничном секторе, таких как стойка регистрации или услуги консьержа, вероятно, будут относительно низкими.

Мария Мендиола, консьерж в San Jose Marriott, обеспокоена тем, что соглашение Amazon разместить свое устройство Echo в гостиничных номерах в отелях Marriott в конечном итоге сделает ее позицию бессмысленной. «Алекса может сделать мою работу в будущем», — сказала она.

В Sheraton Waikiki, рядом с Royal Hawaiian, кассиры в пляжном лаундже беспокоятся о недавно развернутой компьютерной системе, которая позволит серверам закрывать свои собственные чеки, что делает кассиров ненужными.

В продаже есть автоматические посудомоечные машины; машины для переворачивания гамбургеров и смешивания коктейлей; роботы для доставки еды и напитков в номер или помощи в бронировании столика в ресторане.

Новые технологии изменяют конфигурацию рабочего места в другом направлении.Швейцары теряют чаевые, поскольку гости обращаются к Uber и Lyft вместо обычных такси. Так же поступают посыльные, когда гости используют приложение для доставки еды Seamless вместо обслуживания номеров.

Сколько рабочих мест займет технология? Отельерам еще предстоит выяснить, как гости отреагируют на более технологичный опыт. Представитель Marriott заявила в своем заявлении, что сеть не использует технологии для сокращения рабочих мест, а «персонализирует обслуживание гостей и улучшает их пребывание».

Клифф Аткинсон, старший вице-президент MGM Resorts по вопросам гостеприимства, сказал, что новые технологии изменили должностные инструкции в отелях его сети, но не привели к сокращению рабочих мест.Клерки на стойке регистрации, замененные киосками автоматической регистрации, используются в качестве «послов в вестибюле» или консьержей.

Тем не менее, история показывает, что самой сильной мотивацией к развертыванию новых технологий была возможность снизить затраты на рабочую силу. По оценкам профессоров Аджемоглу и Рестрепо, с 1993 по 2007 год каждый новый робот сокращал 5,6 рабочих мест и снижал заработную плату на 0,5 процента.

По мере того, как технологии становятся все лучше и дешевле, появляется множество новых задач, которые они могут взять на себя. «Это новая, неизведанная область для нашей компании и нашей отрасли в целом», — сказал г-н.- сказал Аткинсон. «Мы говорили об одном или двух брендах, которые полностью автоматизированы и обслуживают гостей самостоятельно».

Дэвид Атор, экономист из Массачусетского технологического института, говорит, что можно предвидеть будущее, в котором — как это сделали авиакомпании — отели будут использовать людей для обслуживания элитных гостей и автоматизированные системы для всех остальных. По утверждению профессора Автор, затраты на рабочих значительно превышают их почасовую заработную плату. Они болеют, берут отпуск и требуют менеджеров. «Люди беспорядочные», — отметил он. «Машины просты.

В прошлом году Глобальный институт McKinsey опубликовал отчет, в котором прогнозируется, что технологии приведут к 30-процентному сокращению рабочих мест в сфере общественного питания и жилья в период с 2016 по 2030 год. Это почти соответствует сокращению рабочих мест в обрабатывающей промышленности на 38 процентов с 1960 по 2012.

Профсоюзы предпочли бы, чтобы история производства не повторялась в сфере услуг. «Мы пытаемся опередить это», — сказал Ананд Сингх, президент местного отделения Unite Here в Сан-Франциско. «Мы не луддиты, но мы ищем настоящего голоса за столом.

Международное братство водителей грузовиков также обеспокоено технологией, стремительно проникающей в настоящее. В ходе переговоров по контракту с United Parcel Service в этом году профсоюз сделал смелое предложение: запретить использование дронов или автономных транспортных средств для доставки посылок. Но в сентябре, когда профсоюз разослал соглашение членам для ратификационного голосования, такого положения не было.

Эдвард Виткинд, до этого года возглавлявший Департамент транспортных перевозок компании A.F.L.-C.I.O. заявил, что профсоюзы не смогут остановить развитие технологий, даже если они попытаются это сделать. «Может быть, вы сможете остановить это с помощью одного раунда торга или замедлить его», — сказал он. «Но инновации продолжаются 100 лет и никогда не прекращаются».

И он отметил, какой может быть цена успеха: «Завоевываем ли мы будущее для рабочих? Нет, если компания обанкротится ».

Лучшей стратегией могло бы быть требование высказывать свое мнение о том, как развертываются технологии.

Предварительная сделка Teamsters с U.P.S.например, призывает к предварительному предупреждению профсоюзов за шесть месяцев о развертывании технологий и к созданию комитета с представителями профсоюзов и компаний, который будет вести переговоры «относительно последствий предлагаемых технологических изменений».

Unite Идет по аналогичному пути. Г-н Сингх перечислил цели профсоюзов в отношении контрактов Marriott: «Мы хотим поговорить о том, как технологии могут помочь в выполняемой нами работе и облегчить ее суровые условия, как обучаются наши члены, что происходит с работниками, которые в противном случае были бы отмечены как лишние. , как наши участники перемещаются для достижения успеха или нанимаются на другие рабочие места.

В июне профсоюзу впервые удалось включить защиту от технологических изменений в свои контракты, касающиеся рабочих на объектах MGM Resorts и Caesars Entertainment в Лас-Вегасе. Рабочие будут обучены выполнять рабочие места, созданные или модифицированные с помощью новых технологий, что позволит им участвовать в приросте производительности. Контракты также предусматривают, что компания пытается найти работу для уволенных работников. Но ключевым достижением профсоюза было предупреждение о развертывании технологий за 180 дней.

«Они должны сообщить нам об этом, показать прототипы и провести с нами переговоры», — сказал г-н Тейлор. «В конце концов, они могут двигаться вперед, но это дает нам время, чтобы понять последствия».

Если бы они могли выбрать прецедент из американской трудовой истории, сегодняшние профсоюзные лидеры могли бы пойти по пути Международного союза береговых берегов и складов.

В 1960-х и 1970-х годах докеры были поражены одним из самых революционных технических нововведений 20-го века: контейнерами.Контейнеры одним ударом сократили время и количество рабочих, необходимых для загрузки корабля, что позволило сэкономить огромные суммы денег.

Вместо того, чтобы пытаться остановить большие коробки, профсоюз грузчиков на Западном побережье потребовал долю добычи: богатые пенсионные пакеты для уволенных рабочих и солидное вознаграждение для тех, кто остался. В результате грузчики, работающие полный рабочий день круглый год, в настоящее время зарабатывают в среднем от 168 000 до 186 000 долларов в год.

Но чтобы заключить такую ​​сделку, нужно много энергии.Профсоюз портовых компаний может закрыть порты по своему желанию, что повлечет за собой огромные расходы для грузоотправителей. Для рабочих, не обладающих таким влиянием, успехи, достигнутые грузчиками, кажутся недосягаемыми.

Объединиться Здесь не бессильно. Согласно государственной статистике, по всей стране только 7,6% работников индустрии размещения состоят в профсоюзах. Но в Сан-Франциско, например, Unite Here представляет 89 процентов работников отелей класса А. Отчасти поэтому горничные в Сан-Франциско зарабатывают 22 доллара.64 в час, отмечает профсоюз, что более чем вдвое превышает средний показатель по стране, составляющий 10,09 доллара.

Unite Здесь победы до сих пор были одержаны с большим трудом. «Это был непростой вопрос», — сказал г-н Тейлор о языке технологий в сделках в Лас-Вегасе. «Это действительно ущемляет право отелей делать то, что они хотят».

Результат может принести или не принести большую долю прибыли от технологий рабочим. Но у служащих и консьержей будут лучшие варианты, чем выходное пособие, когда Alexa или компьютерное программное обеспечение возьмут на себя некоторые из их задач.«Это было хорошее решение», — сказал г-н Тейлор. «Время покажет, достаточно ли он хорош».

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Ускоренная микроскопия FRET-PAINT | Молекулярный мозг

Ускоренная диссоциация донорных цепей

Экспериментальная схема FRET-PAINT и приборная установка кратко представлены на рис. 1а. В предыдущей работе мы использовали EMCCD (iXon Ultra DU-897 U-CS0- # BV, Andor) с максимальной частотой кадров 56 Гц и областью изображения 512 × 512. Однако из-за медленной диссоциации ДНК-зондов фактическая частота кадров составляла 10 Гц. В этой работе мы заменили EMCCD камерой sCMOS (ORCA-Flash 4.0 V2, Hamamatsu) с максимальной частотой кадров 400 Гц для того же размера области изображения. Однако из-за фотоиндуцированного повреждения ДНК-зондов, которое будет объяснено более подробно позже, максимальная используемая частота кадров составляла 200 Гц. Чтобы компенсировать короткое время экспозиции, интенсивность освещения следует увеличивать пропорционально частоте кадров. По той же причине фотоиндуцированного повреждения ДНК мы использовали мощность освещения 1,5 кВт / см ² , что всего в 3,3 раза больше, чем в предыдущей работе 460 Вт / см ² .

Рис. 1

| Ускоренная диссоциация донорских цепей. ( a ) Схема микроскопии FRET-PAINT. Акцептор флуоресцирует только через FRET, а его сигнал улавливается высокоскоростной камерой sCMOS. Донорный сигнал отклоняется полосовым фильтром. ( b ) Нити ДНК, использованные в экспериментах: стыковочные (черные), донорные (синие) и акцепторные (красные) цепи. Длину донорной цепи контролировали путем усечения 5′-конца донорной цепи. Акцепторные и донорные флуорофоры помечены в обозначенных позициях.( c-f ) Время диссоциации донорных цепей длиной 9 нуклеотидов ( c ), 8 нуклеотидов ( d ), 7 нуклеотидов ( e ) и 6 нуклеотидов ( f ). На левой панели показаны характерные временные кривые FRET, в которых высокое и низкое состояния FRET соответствуют связанным и несвязанным состояниям, соответственно. Правые панели показывают гистограммы времен диссоциации. Время диссоциации было получено путем аппроксимации гистограмм экспоненциальной функцией затухания: 670 мс (9 нт), 63 мс (8 нт), 4,8 мс (7 нт) и 3.7 мс (6 нт)

Чтобы полностью использовать увеличенную частоту кадров sCMOS-камеры, необходимо также увеличить скорость переключения ДНК-зондов; если диссоциация ДНК-зонда происходит медленно, то при более низких концентрациях зонда пятна одной молекулы начинают перекрываться, ограничивая общую скорость визуализации. Были определены времена диссоциации донорных цепей разной длины. Были протестированы четыре различных донорских нити (рис. 1б, синий). На рис. 1c-f показаны характерные временные кривые (слева) и гистограммы времени диссоциации донорных цепей (справа).Полученное время диссоциации составляло 670 мс (9 нт), 63 мс (8 нт), 4,8 мс (7 нт) и 3,7 мс (6 нт). Измеренные времена диссоциации донорных нитей 7 нт и 6 нт были короче времени экспозиции камеры (5 мс) и должны считаться неточными. Мы выбрали донорные нити длиной 7 нт для частоты кадров 100 или 200 Гц, используемых в данной работе. Auer et al. ранее использовали донорные нити длиной 7 нт [11], но время диссоциации нити было намного больше (88 мс), чем у нас (4,8 мс).

Улучшенное отношение сигнал / шум (SNR)

Фоновый шум, исходящий от плавающих донорных и акцепторных нитей, ограничивает максимальную концентрацию зонда, которую можно использовать.Чтобы уменьшить фоновый шум и, как результат, увеличить максимальную концентрацию зонда для получения разумного отношения сигнал / шум (SNR), мы сначала попробовали разные пары донор-акцептор, кроме Alexa Fluor 488 (AF488, Invitrogen) -Cy5. (GE Healthcare), использованная в предыдущей работе. Что касается фонового шума, чем больше спектральное разделение излучения донора и акцептора, тем лучше отношение сигнал / шум. Было проведено сравнение спектров поглощения и возбуждения красителей Alexa [12], Atto dyes [13, 14], красителей CF [15] и Cy [12], и в качестве кандидатов на замену были выбраны CF488A (Biotium) и CF660R (Biotium). AF488 и Cy5 соответственно.На рис. 2а сравниваются спектры возбуждения (пунктирные линии) и излучения (сплошные линии) AF488 (черный), CF488A (красный), Cy5 (пурпурный) и CF660R (фиолетовый). Спектры поглощения и излучения CF488A смещены в синий цвет по сравнению со спектрами AF488, тогда как их коэффициенты экстинкции аналогичны на пиках. С другой стороны, спектр излучения CF660R смещен в красную область по сравнению со спектром излучения Cy5. В качестве дополнительных усилий по улучшению отношения сигнал / шум мы также заменили длиннопроходный фильтр 640 нм (зеленая пунктирная линия) на полосовой фильтр 700/75 (зеленая сплошная линия). Поскольку полосовой фильтр имеет длину волны отсечки с красным смещением, чем длиннопроходный фильтр, некоторая часть сигнала акцептора теряется при замене, но мы ожидали, что уменьшение просачивания донора приведет к увеличению отношения сигнал / шум при высоком уровне донорной цепи. концентрации. Как и ожидалось из того факта, что CF488A имеет больший коэффициент экстинкции, чем AF488 при 473 нм, пара CF488A-Cy5 дала больше фотонов, чем пара AF488-Cy5 при той же мощности возбуждения (рис. 2b). Фоновый шум и, следовательно, отношение сигнал / шум были значительно улучшены за счет использования полосового фильтра вместо длиннопроходного фильтра.Фоновый шум и отношение сигнал / шум также были улучшены с парой CF488A-Cy5, чем с парой AF488-Cy5 (рис. 2c, d). Примечательно, что упомянутый выше процесс оптимизации почти полностью устранил донорское просачивание, и в результате зависимость отношения сигнал / шум от концентрации донора была очень слабой (рис. 2d). Вопреки нашим ожиданиям, мы обнаружили, что замена Cy5 на CF660R не улучшила SNR, потому что CF660R имеет более высокое прямое возбуждение, чем Cy5 на длине волны 473 нм (дополнительный файл 1: рисунок S1). Поскольку CF660R имеет более низкое прямое возбуждение, чем Cy5 на 488 нм, мы ожидаем, что CF660R может обеспечить лучшую производительность, если мы будем использовать лазер возбуждения 488 нм вместо лазера 473 нм в будущей работе. В данной работе мы использовали исключительно пару CF488A-Cy5 при возбуждении 473 нм.

Рис. 2

| Улучшенное отношение сигнал / шум (SNR). ( a ) Спектры возбуждения (штриховые линии) и излучения (сплошные линии) донорного (AF488, черный; CF488A, красный) и акцепторного (Cy5, пурпурный; CF660R, фиолетовый) флуорофоров.Вертикальная синяя пунктирная линия указывает длину волны возбуждения 473 нм, вертикальная зеленая пунктирная линия указывает длину волны отсечки длиннопроходного фильтра 640 нм, а зеленая сплошная линия указывает кривую пропускания полосового фильтра 700/75 м. ( b ) Акцепторный сигнал пар AF488-Cy5 (черный) и CF488A-Cy5 (красный) при мощности возбуждения 1,5 кВт / см ² , зарегистрированный камерой sCMOS и полосовым фильтром. Сигнал приемника пары AF488-Cy5 (синий) при мощности возбуждения 460 Вт / см ² , зарегистрированный камерой EMCCD и длиннопроходным фильтром.Сигнал определяется как амплитуда двумерной гауссовой функции каждого пятна одной молекулы. Белые квадраты обозначают измеренные значения, а сплошные линии обозначают подогнанные кривые с функцией Гаусса. Пара CF488A-Cy5 дает более высокую интенсивность. ( c ) Фоновый шум пар AF488-Cy5 (черный) и CF488A-Cy5 (красный) при мощности возбуждения 1,5 кВт / см ² с камерой sCMOS и полосовым фильтром. Фоновый шум пары AF488-Cy5 (синий) при мощности возбуждения 460 Вт / см ² с камерой EMCCD и длиннопроходным фильтром.Фоновый шум определяется как FWHM гауссовой функции фонового сигнала. Белые квадраты обозначают измеренные значения, а сплошные линии обозначают подогнанные кривые с корнем квадратным из концентрации донорной цепи. Полосовой фильтр значительно снижает фоновый шум, а пара CF488A-Cy5 дает более низкий фоновый шум, чем пара AF488-Cy5. Горизонтальная зеленая пунктирная линия указывает фоновый шум без донорных и акцепторных цепей, который в основном вызван автофлуоресценцией, исходящей из покровного стекла.( d ) SNR пар AF488-Cy5 (черный) и CF488A-Cy5 (красный) при 1,5 кВт / см ² мощность возбуждения, записанная камерой sCMOS и полосовым фильтром, а также AF488-Cy5 пара (синяя) при 460 Вт / см. ² мощность возбуждения, записанная камерой EMCCD и длиннопроходным фильтром. SNR определяется как отношение сигнала к фоновому шуму. Белые квадраты обозначают рассчитанные значения, а сплошные линии обозначают подогнанные кривые с функцией, обратной квадратному корню от концентрации донорной цепи.Пара CF488A-Cy5 с камерой sCMOS и полосовым фильтром дает наивысшее SNR при высокой концентрации донорных цепей

Характеристика скорости визуализации нового микроскопа

Чтобы охарактеризовать улучшенную скорость визуализации нового микроскопа, мы сравнили скорость визуализации нового микроскопа FRET-PAINT по сравнению с предыдущим. В качестве модельной системы были отображены микротрубочки клеток COS-7. Для нового микроскопа использовались донорные нити 7 нт и мощность возбуждения 1,5 кВт / см ² , тогда как для старого микроскопа использовались нити донора 9 нт и мощность возбуждения 460 Вт / см ² .На рис. 3а показано изображение со сверхвысоким разрешением, полученное на старом микроскопе с частотой кадров 10 Гц и временем сбора данных 1 мин. Для визуализации использовали 30 нМ меченных AF488 донорных цепей и 20 нМ меченных Cy5 акцепторных цепей. На рис. 3b и c показаны изображения сверхвысокого разрешения, полученные с помощью нового микроскопа с частотой кадров 100 Гц для рис. 3b или 200 Гц для рис. 3c. Для визуализации общее время сбора данных составляло 1 мин, и использовали 300 нМ меченных CF488A донорных цепей и 300 нМ меченных Cy5 акцепторных цепей.Как видно из рисунков, новый микроскоп давал изображения более высокого качества, чем предыдущая установка FRET-PAINT, за более короткое время. Ширина поперечного сечения микротрубочек была подобна ранее сообщенному значению (дополнительный файл 1: рисунок S2) [11]. Чтобы показать улучшенное качество изображения более подробно, покадровые изображения областей, выделенных рамкой на фиг. 3a-c, также показаны на фиг. 3d-f соответственно. Чтобы количественно сравнить качество изображения на рис. 3a-c, мы сравнили разрешения изображения в зависимости от времени получения изображения (рис.3г). Разрешение было получено методом корреляции колец Фурье [16, 17]. Примечательно, что разрешение достигло предела (42 нм для 100 Гц, 46 нм для 200 Гц) через 20–30 с с новой установкой FRET-PAINT, тогда как разрешение все еще снижается даже через 60 с с предыдущей установкой FRET-PAINT. настраивать. В принципе, разрешение, определяемое методом корреляции кольца Фурье, зависит как от точности локализации, так и от плотности локализации [16,17,18,19]. Плотность локализации линейно пропорциональна времени визуализации (рис.3h), тогда как точность локализации не зависит от времени. Таким образом, мы можем сделать вывод, что для времени получения изображений в течение десятков секунд разрешение изображения определяется точностью локализации в новом микроскопе. С другой стороны, для того же времени получения изображения разрешение изображения определяется плотностью локализации в старом микроскопе. Плотность локализации как функция времени визуализации на рис. 3h дает еще один способ сравнить скорость визуализации микроскопов. Скорость локализации увеличена на 5.4 раза для изображения 100 Гц и 8 раз для изображения 200 Гц.

Рис. 3

| Характеристика скорости изображения нового микроскопа. В качестве модельной системы использовались изображения микротрубочек со сверхвысоким разрешением фиксированных клеток COS-7. ( a ) Изображение было восстановлено из 600 кадров, записанных с частотой кадров 10 Гц с помощью предыдущего микроскопа (камера EMCCD, фильтр длинного прохода, 460 Вт / см ² мощность возбуждения, 30 нМ 9 нт AF488 донорные цепи, 20 нМ 10 нМ акцепторных цепей Cy5). ( b , c ) Изображения были восстановлены из 6000 кадров, записанных с частотой кадров 100 Гц ( b ) или 12000 кадров, записанных с частотой кадров 200 Гц ( c ) с новым микроскопом ( камера sCMOS, полосовой фильтр, мощность возбуждения 460 Вт / см ( ² , 300 нМ 7 н. донорных цепей CF488A, 300 нМ 9 нМ акцепторных цепей Cy5). Буфер для визуализации (10 мМ Трис-HCl, pH 8,0, 500 мМ NaCl, 1 мг / мл глюкозооксидазы, 5 мг / мл глюкозы, 0,04 мг / мл каталазы и 1 мМ Trolox) использовали для всей визуализации.Все изображения были восстановлены с помощью ThunderSTORM [23] с методом максимального правдоподобия. Общее время визуализации для всех изображений составляет 60 с. ( d — f ) Цейтраферные изображения областей в рамке в a — c в указанное время формирования изображения. ( g ) Разрешение изображения a — c с использованием метода кольцевой корреляции Фурье в зависимости от времени визуализации. Белые квадраты обозначают измеренное значение, а сплошные линии обозначают подогнанные кривые с функцией экспоненциального затухания.