【DOG UP VILLA】3周年記念イベントについてのプレスリリース

詳細はこちら

バラ風呂

毎週水曜日はバラ風呂。「女性浴場 沙の湯」ホワイトイオン露天風呂にてご用意いす0た0た08たイ

詳細はこちら

毎週水曜日はバラ風呂

• ベストレート（最低価格）保証  
  当サイトからのご予約が最もお得です

唯一 の 有馬 で 、 、

六甲 の 雄大 自然 に 囲ま 、 、
四季 の 表情 を 愉しむ ことができる 馬 馬。
日本 三 泉 を 愉しむ 愉しむ ことができる 馬。。。。 も も選ば れる
温泉 効能 豊か で 、 、
かつて は 秀吉 も も
湯治 に 訪れ た と さ れ い ます。
また 摂津 ・ 播磨 但 馬 丹波 ・ ・
から なる 兵庫 五 国 国 国 国 五 五 五 五 五 五 五 五 五 五 五 五 五 の 五 の 五 五 の の の の の の の の の 国 国 国 国 国 国 国 する する する する する する に に に に する する に する する する する する する する する する する する する する する する する する する 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 淡路 9000地 は 、
各地 旬 の 味覚 が 集まる 集まる
食 宝庫 でもあり ます。
そこ は が 揃う 、 唯一 の 場所。
そこ は すべて 揃う 、 唯一 無二 場所。
そこ は に 体験 と と 唯一 無二 場所。
私たち は に しかない と と
最幸 で 、
お客様のすべての一日を、
かけがえのない一日へと誘います。

別墅 銀泉 露天 風 呂付き 貴賓 室 室

別墅 柔の 間 和 洋室

中央館 庭側 和 洋室

北館 和 室

中央館 風 ツイン

千差万別のお部屋で

お二人でも、ご家族でも、
団体でも、そしてお一人でも。
和室から和洋室、洋室、
露天風呂付客室 まで 、
お 様 の 多様 な ご 要望 に に
お応え さまざま な な
タイプ お 部屋 を
ご し て おり。

兵庫 五国 恵み を 、 、

兵庫 五国 の 恵み

兵庫 五国 の 恵み

兵庫 の 恵み

摂津・播磨・但馬・丹波・
淡路からなる兵庫県。
その に 位置 する 有馬 は 、 、
食 の。。
各地 厳選 し た た 旬 の を を
活かし お 料理 の が 、
大切 ひと とき に を ます。 が が
大切 ひと とき 花 添え。。 が

展望 大 浴苑 雲海

ゆらり 紗 の 湯

ゆらり の 湯 湯

アクアテラス

プライベートスパ

金泉 銀泉 が が

太閤 をはじめ をはじめ 、
多く 偉人 たち を
癒やし き た 有馬 温泉。
療養 と 美容 効果 優れ た 「金泉」 」と「 銀 銀 銀 優れ た 」」 と と 「「泉」を、
四季折々の表情を見せる
六甲の自然とともに
ご堪能いただけます。
ご堪能いただけます。

有馬随一の会議場が

森羅

森羅

多槰ば0008

最大 〇〇 名 規模 の の
大型 ホール をはじめ 、
大小さまざま な
会議 ・ 宴会場 を 完備。
セミナー 学会 に 各 イベント ︙ ︙ を。 完備。 温泉 を 兼ね 揃え 種 イベント ︙。。
ホテル 温泉
コミュニケーションの
スタイルがあります。

ガーデン プール

ロビー ラウンジ ルシェッロ

ガーデン プール

ドッグ ・ アップ ・ ヴィラ

バーベキュー 会場

他 は ない 体験 が が

お 子 様 に 人気 の プール から
大人 楽しめる 楽しめる
バーベキューテラス 、 、
愛犬 の 新しい 旅 を 提案 する する アップヴィラ ︙。。。。。。。。。。。。。。。。 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 他 に に に に に に に に に に に する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する する 提案 提案 提案 する する 提案 提案 する する 楽しめる 楽しめる 9000 ドッグない 、 し た 施設 の 数 々。
あらゆる に 寄り添う 特別 な 体験 が 、
皆様 一 日 を の ない
一 へ と 誘い。

人生 、 、

人生 、 一 期 一会。。
一生 に 度 の 記念 も 、 一会。。 いつも 変わら 変わら 一 日 も。。。。。。。。。。。。。。 、 日 日 と と と と と と と と と と と と と と と と と と 、 、 、 、 、ます。
この世に生をうけたときから、
人生を終えるときまで。
一期一会の日々に、ずっと寄り添い続ける。
そして、人生を振り返ったときに、
いい思い出とともにいつもある。
みなさまにとってそんなホテル であれる 、 、
私たち 今日 も も 最幸 の おもてなし で
お迎え ます。。

有 馬グランド ホテル 想い

大阪 ・ 京都 駅 から は 高速 バス で 40 分。。
三宮 は は 30 分 程度 で お越し ただけ ます。
また 伊丹 空港 や 神戸 空港 も タクシー で
40 分 遠方 の 旅行 空港 も から も も も も も快適です。

【夕朝食｜お部屋食確約】旬菜会席｜黒毛和牛と旬の味覚をご堪能

ご予約はこちら

【巣ごもり プラン】 夕朝 お 部屋 食 で 更に グレード！ 特選 お造り と 神戸 牛陶板 焼き の 会 席

ご予約はこちら

【あんしん巣ごもりプラン】露天風呂付き夕朝お部屋食｜厳選懐石　≪クラブフロア≫ 90 08

ご予約はこちら

【カスタム会席】新たな料理スタイル。約100種のメニューから選ぶ、貴方だけの会席料08

ご予約はこちら

ＫＡＩＳＥＫＩ｜石窯で絶妙な火入れの牛フィレ肉をメインに【ダイニング時分時】

ご予約はこちら

ダイニング時分時｜音や香りも愉めるライブ感溢れる本格串揚げコース

ご予約はこちら

ベストレート （最低 価格） 保証

有 馬グランド の ご 予約 は 、 当 公式 ホーム ページ から ご 予約 が お得 です。 当 公式 ホーム ページ から ご 予約 一番 お得 です。 当 公式 ホーム ページ から ご 予約 一番 お得 です。 当 公式 ホーム ページ から ご 予約 一番 お得 です。 当 公式 ホーム ページ の ご 予約 一番 お得 です。 当 公式 ホーム ページ の ご 予約 一番 お得。。 当 公式 ホーム ページ の ご 予約 一番 お得。。 当 公式 ホーム ページ の ご 予約 一番 お得。。 当 公式 ホーム ページ の ご 予約 一番 お得。。 当 公式 ホーム ページ の ご 予約 一番 お得。。 当 公式 ホーム ページ の ご 予約 一番 お得。。

有 ホテル の 公式 サイト申込み 時点 他社 インターネット サイト より も お得 な 料金 である こと を し ます。

有 馬グランド 公式 サイト へ ご 予約 ください。
ご 後 24 時間 に 、 同一 、 タイプ 宿泊 予約 後 後 後 時間 に 同一 、 、 プラン、 日程 で
より 料金 が みつかっ た 場合 、 当館 予約 係 まで お ください ください。
お 内容 を 確認 、 承認 さ。 場合 、 、 ご 宿泊 を
お から た た と と と と と と と と と と と とお泊りいただくことを保証いたします。

ベストレート保証条件

ベストレート 保証 する に あたり 、 下記 の 条件 を 満たす 必要 が ござい ます。

1. 有 ホテル 公式 から の ご 予約 である こと
2. 同一ホテル
3. 同一宿泊日（到着日・出発日）
4. 同一宿泊プラン
5. 同一宿泊人数（お子様は除く）
6. 同一お部屋タイプ
7. 同一精算方法
8. 同一サービス、販売条件、キャンセル条件

ベストレート保証対象外

ベストレートの保証にあたり、下記の場合は比較対象から除外させていただきます。
予めご了承願います。

1. 法人契約料金など、一般には公示されていない料金
2. 特定の会員組織を対象とした料金
3. 宿泊以外の施設利用や交通機関、食事などを伴うパッケージ料金
4. ポイントや金券等の付与された特典を割引とみなした料金
5. 関与できない料金
6. クーポン券、バウチャー、クレジットカードなどによる前払いを条件とした料金

お問い合わせはこちら

有馬グランドホテル・予約係（9:00～21:00）

Возбудитель увядания индуцирует различные вариации связанных с корнями микробиомов растений

Введение

В природе растения не растут как одиночные организмы, а содержат большое разнообразие микроорганизмов. Эти микроорганизмы, обитающие в ризосфере, ризоплане, филлосфере и эндосфере, образуют микробные сообщества и в совокупности называются растительными микробиомами (Turner et al., 2013; Müller et al., 2016). Микробиомы растений эволюционируют вместе с хозяином и оказывают глубокое влияние на ряд аспектов продуктивности растений (Simon et al., 2019).; Trivedi et al., 2020), включая наличие питательных веществ (Martin et al., 2017), устойчивость к абиотическому стрессу (de Vries et al., 2020) и подавление болезней (Mendes et al., 2011; Carrión et al., 2019). ). Таким образом, понимание микробиомов растений будет иметь важные последствия для здоровья растений, продуктивности и функционирования экосистемы (Sessitsch and Mitter, 2015).

Почва является крупнейшим известным резервуаром микробного разнообразия (Torsvik et al., 2002), а корень является критической зоной для взаимодействия растений и микробиома. Корневую зону можно разделить на три ризокомпартмента: ризосферу (почва вблизи поверхности корня), ризоплану (поверхность корня) и эндосферу (внутренняя часть корня), каждый из которых, как было обнаружено, содержит отдельный микробиом (Edwards et al. , 2015). Недавно была предложена трехступенчатая модель обогащения, чтобы продемонстрировать процесс формирования трех компартментов на границе почвы и корня (Reinhold-Hurek et al., 2015). Подходящая физико-химическая среда и богатые питательными веществами корни могут привлекать микроорганизмы, мигрирующие из насыпной почвы к корням. При этом часть микроорганизмов обогащается в почве вблизи корней и формирует ризосферный микробиом. Затем специализированное сообщество дополнительно обогащается на поверхности корня и формирует микробиом ризопланы. Наконец, некоторые микроорганизмы, которые имеют более высокую совместимость с растениями, проникают и занимают ниши в корнях растений и создают микробиом эндосферы, что оказывает большое влияние на рост и здоровье растений (Reinhold-Hurek et al., 2015). Считается, что микробные сообщества, населяющие три ризокомпартмента, в основном происходят из основной массы почвы и постепенно фильтруются в разных нишах компартментов (Xiong et al., 2021). Однако остается неясным, влияют ли биотические стрессы, такие как болезни, на процесс обогащения трех связанных с корнем микробиомов.

Предыдущие исследования показали, что изменения в микробиомах растений — это не просто пассивные реакции растений, а результат совместной эволюции, и растения могут активно обращаться к микробам за помощью для снятия стресса (Liu et al., 2020). Вербовка микробов при биотических или абиотических стрессах, вероятно, является стратегией выживания, сохраняющейся во всем царстве растений, известной как стратегия «крик о помощи» (Gao et al., 2021; Liu et al., 2021). Растения могут рекрутировать некоторые полезные микробы из окружающих почв, а структура и функции растительных микробиомов изменяются, а затем собираются заново (Xiong et al., 2021). Например, Stenotrophomonas rhizophila (SR80) был обогащен как ризосферой, так и корневой эндосферой пшеницы, инфицированной Fp , и повторная инокуляция SR80 в почву может улучшить как здоровье растений, так и подавление болезней (Liu et al., 2021). Болезнь фузариозного увядания сильно повлияла на сборку бактериального и грибкового сообщества микробиомов корня и стебля, и потенциально полезные бактерии, такие как Pseudomonas , Streptomyces и Bacillus , были обогащены больными растениями перца (Gao et al. , 2021). На сборку микробного сообщества в основном влияют хозяин, факторы окружающей среды и потенциальные взаимодействия между микробными особями (van der Heijden and Hartmann, 2016; Duran et al., 2018). Кооперативные и конкурентные взаимодействия между различными микробами в разных средах обитания можно охарактеризовать с помощью сетевого анализа совместной встречаемости микробов (Feng et al., 2019).). Растущее число исследований свидетельствует о том, что ключевые элементы (например, соединители, концентраторы модулей и сетевые концентраторы) в микробных сетях имеют решающее значение для прогнозирования роста и приспособленности растений (Tao et al., 2017; Hu et al., 2020; Tao и др., 2021). Однако большинство предыдущих исследований часто были сосредоточены на микробиоме ризосферы, и систематическое понимание сборки микробиома в ризосфере, ризоплане и эндосфере при инвазии патогенов остается неясным.

Болезнь бактериального увядания вызывается Ralstonia , которые поражают широкий спектр культур Solanaceae , таких как табак, помидоры и баклажаны (Jiang et al. , 2017). Патоген Ralstonia выживает в почве, проникает в растение через корневые раны и разрушает систему сосудистых пучков растения-хозяина, что приводит к увяданию и гибели растения-хозяина (Li et al., 2017). Чтобы выявить структуру, изменчивость и сборку трех непрерывных корневых микробиомов с инвазией Ralstonia , образцы почвы и корней были собраны со здоровых или больных полей с растениями табака. Используя секвенирование гена 16S рРНК, мы стремимся (i) описать таксономические и функциональные сдвиги в трех связанных с корнем микробиомах при бактериальном увядании, (ii) исследовать, какие члены в разных микробиомах оказывают положительное влияние на растение при атаке патогена, и (iii) сравнить сети здоровых и больных корневых микробиомов, чтобы дать представление о стабильности сообществ.

Материалы и методы

Сбор и обработка проб

Все пробы были отобраны в основных районах выращивания табака в Тяньчжу (26°58’15» с.ш., 109°15’34» в.д. ), провинция Гуйчжоу в Китае . Среднегодовая температура в Тяньчжу составляет 16,1 ° C, а среднегодовое количество осадков составляет от 1200 до 1380 мм. Был высажен сорт табака Юньян 87, и сбор образцов был проведен 4 сентября 2021 года. Было два соседних участка, на которых растения табака демонстрировали значительно разные симптомы увядания. Табаки на здоровом поле показали здоровые условия, а табак на больном поле показал тяжелые симптомы увядания (уровень заражения 5–9).). Со здоровых и больных участков брали по 6 повторов как почвы, так и корней соответственно. Каждая повторность представляла собой составной образец, образованный путем смешивания двух отдельных образцов.

Насыпную почву собирали на расстоянии 20 см от корня с глубины 0–15 см. Три ризокомпартмента постепенно собирали в соответствии с предыдущими исследованиями с некоторыми изменениями. Все растение было вырвано с корнем из почвы. Свободно прикрепленную почву вручную стряхивали с корней, а ризосферную почву собирали, аккуратно счищая оставшуюся почву с корней (Zhang et al. , 2017). Корни с удаленным ризосферным отсеком помещали в пробирку объемом 50 мл с 15 мл стерильного раствора фосфатно-солевого буфера (PBS). После обработки ультразвуком на частоте 40 кГц в течение 1 мин PBS переносили в новую чистую пробирку. Повторно добавляли PBS в обработанные ультразвуком корни и повторяли ту же процедуру обработки ультразвуком до тех пор, пока с помощью микроскопии не могли быть обнаружены клетки в супернатанте. Смешанный раствор PBS центрифугировали при 12 000 × g в течение 10 минут для сбора микробов ризопланы (Edwards et al., 2015). Обработанные ультразвуком корни хранили при температуре -80°C для экстракции эндосферной ДНК.

Экстракция ДНК и секвенирование ампликона

Каждый образец растения был разделен на четыре компартмента: основная почва, ризосферная почва, ризоплан и эндосфера. В общей сложности 0,5 г нерасфасованной почвы, ризосферной почвы или микробного обогащения ризоплана использовали для выделения ДНК с использованием набора Mag-Bind ^® Soil DNA Kit (Omega Biotek Inc. , Доравилль, Джорджия, США) в соответствии с инструкциями производителя. Для корневой эндосферы около 5 г обработанного ультразвуком образца, как указано выше, стерилизовали поверхность путем последовательного погружения на 5 минут в 75% этанол, 5 минут в 1% раствор гипохлорита натрия и 30 с в 75% этанол и, наконец, промывали стерильной H ₂ O три раза. Простерилизованные корни измельчали ​​с помощью стерильных ступок и пестиков с жидким азотом, а затем из 0,4 г полученного порошка выделяли ДНК с помощью набора Mag-Bind ^® Soil DNA Kit. Концентрацию ДНК оценивали на спектрофотометре NanoDrop ^® 1000 (Thermo Scientific), качество ДНК оценивали на 1,0% агарозном геле. Участок V3-V4 (341F/805R) и участок V5-V7 (799F/1193R) бактериального гена 16S рРНК амплифицировали для эпифитных и эндофитных микробов соответственно. Последовательности праймеров и условия ПЦР-амплификации показаны в таблице S1. ПЦР проводили в 25 мкл смесей, содержащих 12,5 мкл TaqMaster Mix (Vazyme, Piscataway, NJ, USA), 2,5 мкл прямых/обратных праймеров (1 мкМ), 2,0 мкл ДНК (~25 нг/мкл) и ДНКазу-РНКазу- Бесплатная деионизированная вода для регулировки громкости. Продукты ПЦР очищали с использованием E.Z.N.A. Набор для гель-экстракции ТМ (OMEGA Biotek Inc., Доравилль, Джорджия, США). Очищенные продукты ПЦР объединяли в эквимолярных концентрациях для построения библиотеки. Высокопроизводительное секвенирование проводили на платформе MiSeq (Illumina, Сан-Диего, Калифорния, США).

Обработка данных секвенирования ампликона

Последовательности гена 16S рРНК обрабатывали с использованием QIIME 2 (Quantitative Insights Into Microbial Ecology 2, версия 2019.7) (Bolyen et al., 2019) и USEARCH v10.0 (Edgar, 2010). DATA2 (Callahan et al., 2016) использовали для контроля качества, химерной фильтрации и для вывода уникальных последовательностей образцов (вариантов последовательности ампликонов, ASV) на основе данных секвенирования. Впоследствии ASV были отнесены к таксономическим группам путем сравнения с прокариотической базой данных SILVA v138 (Yilmaz et al., 2014). Индексы альфа-разнообразия (Шеннон, Чао1 и Симпсон) и показатели бета-разнообразия (Брей-Кертис) бактериального сообщества рассчитывались в QIIME 2 с помощью плагина разнообразия (q2-разнообразие). Для устранения влияния разной глубины секвенирования таблицы бактериальных ASV были разрежены до 29546 считываний для оценок индекса альфа-разнообразия. Филогенетическое исследование сообществ путем реконструкции ненаблюдаемых состояний (PICRUSt2) применялось для прогнозирования потенциальных функциональных профилей бактериального сообщества с использованием данных гена 16S рРНК (Douglas et al., 2020).

Статистический анализ

Все статистические анализы были выполнены с использованием специальных пакетов в R версии 3.6.3 (R Foundation for Statistical Computing, Вена, Австрия). Индексы альфа-разнообразия (индекс Шеннона, индекс Chao1 и индекс Симпсона) бактериального сообщества рассчитывали в QIIME 2. Бета-разнообразие бактериальных сообществ оценивали путем вычисления матриц расстояний Брея-Кертиса и визуализировали с использованием графиков анализа основных координат (PCoA). Относительный вклад различных факторов в несходство сообществ оценивали с помощью статистических тестов перестановочного многомерного дисперсионного анализа (PERMANOVA) с использованием функции Адониса (пакет R « веганский «). Эффекты бактериального увядания в отдельных корневищах также оценивались с помощью PERMANOVA. Односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) с последующим тестом Тьюки использовался для определения статистической значимости среди групп. Диаграммы Венна и анализ тепловых карт были выполнены с использованием пакетов « venndiagram » и « pheatmap » в R. Тройные графики визуализировались путем расчета средней относительной численности ASV в каждом отсеке с использованием « vcd 9».0353 »в пакете R. Модель SourceTracker применялась для прогнозирования относительного вклада различных микробных компартментов в процесс обогащения от объемных почвенных сообществ до корневых эндосферных сообществ. Процентные значения были рассчитаны с помощью пакетов функций « sourcetracker » и « прогнозировать » в R (Knights et al., 2011).

Молекулярно-экологические сети на основе теории случайных матриц

Молекулярно-экологические сети для корневых микробиомов в здоровых и больных условиях были построены через онлайн-конвейер (http://ieg2. ou.edu/MENA/). Для каждой сети для сетевого анализа были включены ASV (относительная численность > 0,01 %), представленные как минимум в 4 из 6 биологических повторов. Значение St было автоматически определено с помощью подхода, основанного на теории случайных матриц (RMT), который наблюдал точку перехода распределения интервалов ближайших соседей собственных значений от распределения Гаусса к распределению Пуассона (Чжоу и др., 2011). Сети визуализировались с помощью интерактивных платформ Gephi и Cytoscape. Узлы представляют отдельные ASV, а ребра представляют парные корреляции между узлами в сети микробиома, указывая на биологически или биохимически значимые взаимодействия. Топологии узлов можно разделить на четыре категории в зависимости от значения связности внутри модуля (9).0352 Zi ) и межмодульное подключение ( Pi ): периферийные узлы ( Zi ≤ 2,5 и Pi ≤ 0,62), разъемы ( Zi ≤ 2,5 и Pi 3 > 0,62), 9-модульный концентратор ( Pi 3 > 0,62). Zi > 2,5 и Pi ≤ 0,62), а также сетевые концентраторы ( Zi > 2,5 и Pi > 0,62) (Olesen et al., 2007).

Результаты

И ниши, и болезни влияют на распространение и источник корневых микробиомов

Всего было получено 2 800 052 высококачественных последовательности бактериальной 16S рРНК из 48 образцов (в среднем: 58 334; диапазон: 44 904–75 018 прочтений на образец). После удаления последовательностей химер и органелл с помощью USEARCH из этих прочтений было идентифицировано 14 416 ASV. Результаты показали, что микробиомы, связанные с корнями, имеют разные модели структуры сообщества и микробного разнообразия в компартментах ризосферы, ризопланы и корневой эндосферы (рис. 1, S2, S3). PCoA расстояния Брея-Кертиса показал, что основная масса почвы и связанные с корнями микробиомы сформировали три отдельных кластера независимо от состояния здоровья растений (рис. 1A). Анализ PERMANOVA был проведен для оценки относительного вклада корневищной ниши и бактериального увядания в структуры корневых микробиомов. Результаты расчетов показали, что ниша компартмента объясняет большой источник вариаций в данных микробиома (63,54%, P < 0,001), а бактериальное увядание показало относительно небольшое влияние на различия корневых микробиомов (6,85%, P < 0,001). PCoA микробиома каждого компартмента показал, что бактериальное увядание вызывало значительные различия в структурах сообщества ризосферы, ризопланы или корневой эндосферы (PERMANOVA; P <0,001) (рис. 1A), но структура основного почвенного сообщества не была значительно поражены болезнью (ПЕРМАНОВА; P = 0,105) (рисунок S1).

Рисунок 1 Сообщество связанных с корнями микробиомов. (A) Анализ основных координат (PCoA) матриц несходства Брея-Кутиса, показывающий влияние ниши компартмента и бактериального увядания на структуру сообщества микробиомов ризосферы, ризопланы и эндосферы. (B) Индекс разнообразия Шеннона бактериальных сообществ в корнеассоциированных микробиомах здоровых и больных растений Звездочками отмечены достоверные различия (*** P < 0,001). (C) Гистограмма с накоплением, показывающая филюмный состав в трех корневищных отделах здоровых и больных растений на основе данных об относительной численности.

Показатели альфа-разнообразия (индекс Шеннона, богатство Chao1 и индекс Симпсона) показали явный нисходящий тренд от ризосферы к эндосфере (рис. 1B, S2). Бактериальное альфа-разнообразие в компартментах ризосферы и ризопланы не было затронуто бактериальным увяданием (ANOVA; P > 0,05). Однако альфа-разнообразие в больной эндосфере было значительно ниже, чем в здоровой, с точки зрения индекса разнообразия Шеннона и индекса Симпсона (ANOVA; P <0,001) (рисунки 1B, S2). Таксономическая классификация показала, что как бактериальные типы, так и роды отчетливо различаются по нишам компартментов (рис. 1C, S3). Ризоплан и эндосфера имели значительно большую долю Gammaproteobacteria, Actinobacteria и Bacteroidota, чем ризосфера, тогда как Acidobacteria, Chloroflexi, Firmicutes, Gemmatimonadota и Verrucomicrobiota были в основном истощены в ризоплане и эндосфере по сравнению с ризосферой (рис. 1C). Различия в составе между тремя ризокомпартментами более значительно различались на уровне рода (рис. S3). Три компартмента разделяют только 138 родов, а ризосфера имеет наибольшее количество отдельных родов (165), за ней следует ризоплан (110). Кроме того, таксономическая классификация каждого компартмента показала, что разные компартменты меняли отдельных членов при бактериальном увядании, а ризоплан и эндосфера были поражены болезнью больше, чем ризосфера (рис. 1C, S3). Например, Allorhizobium-Neorhizobium-Pararhizobium-Rhizobium , Ensifer и Sphingomonas были значительно обогащены больным ризопланом, в то время как Pseudomonas и Stenotrophomonas были значительно обогащены эндосферой .

Чтобы лучше понять, как болезнь бактериального увядания влияет на бактериальное сообщество, сравнили специально обогащенные вирусы ASV в каждом отделении и микробные источники каждого отделения в здоровых и больных образцах (рис. 2). Тройные графики показали, что более специфичные ASV были обогащены в ризосфере, чем в ризоплане и эндосфере как в здоровых, так и в больных условиях. По сравнению со здоровыми образцами (489и 302 обогащенных АСВ в ризосфере и эндосфере соответственно), достоверно больше было обогащено АСВ в больной ризосфере (579) и эндосфере (387), тогда как специфических АСВ в ризоплане несколько снизилось (с 232 до 225) ( Фигуры 2А, Б). Анализ SourceTracker показал, что корневые микроорганизмы в основном происходят из насыпной почвы, но тенденции отличались в здоровых и больных образцах (рис. 2C, D). В здоровых образцах большинство микробных представителей ризосферы (83,51%) произошло из насыпной почвы, затем микроорганизмы постепенно отфильтровывались в ризопланном и эндосферном отделах. Большинство членов эндосферы (88,07%) мигрировали из ризопланы, и никаких микроорганизмов не было из ризосферы или основной почвы (рис. 2C). В больных образцах ризосферные микроорганизмы (76,48 %) также происходили преимущественно из насыпи почвы и постепенно фильтровались в разных нишах растительных компартментов. Однако для корневых эндосферных микроорганизмов в больных образцах основная часть почвы (21,80%) и ризосфера (10,62%) также были важными источниками микробиома эндосферы, за исключением ризопланы (64,25%) (рис. 2D).

Рисунок 2 Распределение ASV по разным отсекам. (A, B) Тернарные графики, изображающие бактериальные ASV, значительно обогащенные тремя корневыми микробиомами (FDR, p <0,01) в здоровых и больных условиях. Каждый круг представляет один ASV, а размер каждого круга представляет его относительную численность. Разные цвета обозначают разные отсеки. (C) Анализ источников, показывающий источники микробиомов ризосферы, ризопланы и эндосферы у здоровых растений. (D) Анализ источников, показывающий источники ризосферных, ризоплановых и эндосферных микробиомов больных растений.

Все вышеприведенные результаты показали, что инвазия патогенов может влиять на распределение связанных с корнями микробиомов и способствовать расширению корневой системой растений экологического диапазона рекрутируемых микроорганизмов.

В трех ризокомпартментах значительно различаются OTU при заболевании

Учитывая стратегию рекрутирования растений полезными микробами, мы определили обогащенные или обедненные ASV (относительная численность > 0,01%) в каждом ризокомпартменте больных образцов с использованием диаграмм Манхэттена (рис. 3) . В трех компартментах вирусы ASV, обогащенные больными образцами, принадлежали к широкому спектру бактериальных типов, включая Actinobacteriota, Bacteroidta, Patescibacteria, Proteobacteria (в основном Alphaproteobacteria и Gammaproteobacteria) и WPS-2 (с поправкой на FDR 9).0352 P < 0,05, критерий суммы рангов Уилкоксона; Рисунки 3А–С). Ризосфера и эндосфера больных образцов содержали одинаковое количество вирусов ASV (42). Среди них Dyadobacter ASV_6201, Ochrobactrum ASV_530 и Pseudomonas ASV_4114 в ризосфере и Shinella ASV_8061 в эндосфере были «новыми микробами» в больных образцах, которые не присутствовали в 5 % больных образцов, которые не присутствовали в 5 ≥ % образцов. здоровые образцы (рисунки 3A, C и таблицы S2, S4). Для сравнения, больная ризоплана была обогащена большим количеством ASV (в основном принадлежащих к Alphaproteobacteria) при одновременном истощении большей части ASV (79).против 84) (рис. 3D). Более того, ризоплана больных образцов представляла собой большое количество различных ASV (новых микробов), уникальных для здоровых образцов, которые явно отличались от сообщества эндосферы (рис. S4). Среди обогащенных ASV ризопланы Mycobacterium ASV_11679 и Saccharimonales ASV_12660 представляли собой «новые микробы» в больных образцах (рис. 3B и таблица S3). Что касается обогащенных ASV, ни один из них не был общим для трех компартментов, и только 11 ASV были общими для двух из них (рис. 3D). Общие ASV были отнесены к разным родам, например Allorhizobium-Neorhizobium-Pararhizobium-Rhizobium , Bosea , Rhodopseudomonas , Ochrobactrum , Pseudoxanthomonas , so 3 на Labr5353 и

Чтобы исследовать влияние болезни на функции сообщества различных компартментов, метагеномы бактериальных сообществ были предсказаны с использованием PICRUSt2, а затем аннотированы со ссылкой на базу данных KEGG. Всего 7,986 КО (KEGG Orthologs) были предсказаны в трех корневых сообществах. Наши результаты показали, что микробиом эндосферы в больных корнях обладал значительно более низким разнообразием KO (т.е. богатством Chao1), чем в здоровых корнях (ANOVA; P <0,01). Однако микробиом больного ризоплана показал более высокое разнообразие KO, чем здоровый (ANOVA; P <0,05) (рис. 5A). Анализ PCoA на уровне KO показал, что функции сообщества трех компартментов значительно отличались друг от друга (R ² = 0,548, P <0,001), а бактериальное увядание также оказало значительное влияние на функции микробиома для трех компартментов (R ² = 0,125, P <0,001) (рис. 5B). Несколько генов, связанных с циклами C, N и P, показали различный характер среди трех корневых сообществ (рис. 5C). В частности, функциональные гены, участвующие в нитрификации (например, amo A, amo B и amo C) и транспорте P (например, pst A, pst B, pst C и pst S) были более распространены в микробиоме ризосферы, гены, связанные с деградацией C (например, xyl A и xyl B) и денитрификация (e.e.2.g903). nor C, nir S и nos Z) были более распространены в микробиоме ризопланы, а гены редукции N (например, nar G, nar H, nar I,

2 3 A 2, nas 3 A nas B и nir D) и гены фиксации N (например, nif H, nif D и nif K) были более распространены в микробиоме эндосферы (рис. 5C). Для отдельных компартментов болезнь оказывала более значительное влияние на ризоплану и эндосферу, чем на ризосферу. Для микробиомов ризопланы и эндосферы гены, участвующие в восстановлении N, были обогащены, а гены транспорта P были истощены в больных образцах (рис. 5C).

Рисунок 5 PICRSt предсказал функции метагенома на уровне KO. (A) Функциональное разнообразие профилей КО микробиомов ризосферы, ризопланы и эндосферы у здоровых и больных растений. Звездочками отмечены значимые различия (* P < 0,05; ** P < 0,01). (B) Анализ PCoA функциональных генов на основе матрицы расстояний Брея-Кертиса KO. (C) Тепловая карта, показывающая относительное количество функциональных генов (на основе KO), участвующих в циклах C, N и P, которые варьировались в трех связанных с корнями микробиомах.

Далее мы сравнили функциональные гены, участвующие в сигнальных путях растительного микробиома (например, в передаче сигнала) (рис. S5, рис. 6). Распределение генов передачи сигнала, очевидно, различалось в трех микробиомах, связанных с корнями, и микробиомы ризопланы и эндосферы были более восприимчивы к болезням (рис. S5). Например, относительное количество генов, связанных с семейством клеточного цикла и семейством спороношения, было значительно увеличено в микробиоме больного ризопланы (ANOVA; 9). 0352 P <0,05) по сравнению со здоровым растением (рис. 6А). Относительное количество функциональных генов, участвующих в семействе хемотаксиса (например, K03406: хемотаксис, принимающий метил), семействе NtrC и семействе NarL, было значительно выше в микробиоме эндосферы больного корня (ANOVA; P <0,05) по сравнению с здоровое растение (рис. 6B).

Рисунок 6 Дифференциальный анализ численности функциональных генов микробиома, участвующих в сигнальных путях растительного микробиома, которые значительно различались в здоровой и больной ризоплане или эндосфере. (A) Функциональные гены в семействах клеточного цикла и спороношения демонстрируют значительные различия между здоровыми и больными микробиомами ризопланы. (B) Функциональные гены в семействах NarL, NtrC и хемотаксис демонстрируют значительные различия между микробиомами здоровой и больной эндосферы. Звездочки обозначают существенные различия (* P < 0,05).

Все приведенные выше результаты показали, что функция сообщества эндосферы и ризопланы значительно изменилась при инвазии патогена, но.

Обсуждение

Выявление изменений в структуре и сборке микробиомов, связанных с растениями, при инвазии болезней растений необходимо для продвижения коэволюционной теории взаимодействия растений и микробиомов (Liu et al., 2020). В этом исследовании мы охарактеризовали состав трех отдельных ризокомпартментов — ризосферы, ризопланы и эндосферы, и получили представление о влиянии болезней растений на каждый из этих компартментов. Наши результаты показали, что на сборку сообщества трех микробиомов, связанных с корнями, одновременно влияли компартмент-ниша и бактериальное увядание. Микробиомы в корне растения или рядом с ним (эндосфера и ризоплан) были более чувствительны к заболеванию растений, чем микробиом ризосферы, с точки зрения множества микробных атрибутов (например, альфа-разнообразие, структура сообщества, микробные сети и функции сообщества). Однако стратегии реагирования микробиомов эндосферы и ризопланы явно различались.

Предыдущие исследования показали, что растительный компартмент является решающим фактором, влияющим на сборку связанных с растениями микробиомов (Cregger et al. , 2018; Gao et al., 2021). Как и в этих отчетах, наши результаты показали, что три ризокомпартмента сформировали отдельные микробные сообщества независимо от состояния здоровья растений (рис. 1А). Модели микробного разнообразия (индекс Шеннона, богатство Chao1 и индекс Симпсона) показали очевидный градиент от ризосферы к эндосфере (рис. 1B), что указывает на фильтрующий эффект растений-хозяев на тесно связанную сборку микробиома (Reinhold-Hurek et al., 2015). Мы отметили, что доля Proteobacteria выше в компартментах ризоплана и эндосферы по сравнению с ризосферой, и что относительная численность Acidobacteria и Gemmatimonadota была выше в ризосфере (рис. 1C), что было похоже на микробный состав других видов растений. , например Arabidopsis (Schlaeppi et al., 2014), рис (Edwards et al., 2015) и цитрусовые (Zhang et al., 2017). Поэтому мы пришли к выводу, что распределение различных типов бактерий, связанных с корнями растений, может быть сходным для большинства наземных растений. Кроме того, функциональный анализ в нашем исследовании показал, что функциональное разнообразие и обогащенные функциональные признаки в микробных сообществах варьировались в трех ризокомпартментах (рис. 5). Мы продемонстрировали, что гены, участвующие в восстановлении нитратов ( nar G, nar H и nar I) и ген ассимиляции азота ( nas A и nas B) были обогащены от ризосферы до эндосферы (рис. 5C), что еще раз указывает на важность азота. ресурсное обеспечение растений для ризомикробиомов.

Мы обнаружили, что бактериальное увядание по-разному влияет на сообщества трех ризокомпартментов, в которых эндосфера более чувствительна к заболеванию (рис. 1). В целом низкое микробное разнообразие микробного сообщества способствовало инвазии патогенов (Locey and Lennon, 2016). Действительно, в нашем исследовании эндосфера, которая имела самые низкие индексы разнообразия Шеннона, Чао1 и Симпсона (рис. 1B), показала значительно более высокую численность патогена ( Ralstonia ) (рисунок S3). При успешной инвазии патогенов эндосферный микробиом был нарушен, а структура и функции сообщества явно изменились (Wei et al., 2017). Предыдущие исследования показали, что совокупность корневых бактерий в основном происходит из очень разнообразного почвенного микробиома, окружающего корни (Zgadzaj et al., 2016). Здесь мы обнаружили, что бактериальный источник эндосферного сообщества также находился под влиянием инвазии патогенов. У здоровых растений редкие микроорганизмы наблюдались из ризосферы или насыпной почвы в эндосферу, тогда как насыпная почва (21,80%) и ризосфера (10,62%) стали важными источниками микробиома эндосферы в больных образцах (рис. 2C, D). Результаты согласуются с недавним исследованием, согласно которому эндофитные сообщества инфицированных растений также происходят из почвенных сообществ (Hu et al., 2020). патогенный Ralstonia , обогащенная эндосферой, может начаться в почве и перейти к корням растений.

В сложных условиях растения могут активно искать помощи у микробов для снятия стресса. Предыдущие исследования показали, что растения с инвазией патогенов могут использовать различные химические стимулы для привлечения полезных микробов/признаков из окружающей среды (Liu et al., 2021). Полезные микробы, привлекаемые растениями, выступали в качестве ключевых членов растительного микробиома и повышали устойчивость растений к болезням, напрямую взаимодействуя с патогенами (например, конкуренция и антибиоз) (Woo et al., 2006) или модулируя защитные реакции растений (Mejía et al. , 2014). Например, корни растений сахарной свеклы, обогащенные хитинофагами и флавобактериями в корневой эндосфере, и реконструкция консорциума из Chitinophaga и Flavobacterium постоянно подавляли грибковое заболевание корней (Carrión et al., 2019). Здесь обогащенные бактериальные члены в трех микробиомах, связанных с корнем, значительно различались (рис. 3), что указывает на то, что микробная колонизация в нишах, связанных с растениями, не является пассивным процессом и что растения обладают способностью выбирать определенных микробных членов или что разные микробы склонны обогатиться в благоприятных нишах для колонизации (Edwards et al. , 2015). Среди этих обогащенных микробов большинство из них были обогащены местным сообществом и распространены в различных родах бактерий. Кроме того, у больных растений в каждом ризокомпартменте появилось несколько новых микробов (на уровне ASV) (рис. 3 и таблицы S2–S4). Например, по сравнению со здоровыми образцами Dyadobacter ASV_6201, Ochrobactrum ASV_530, and Pseudomonas ASV_4114 in the rhizosphere, Mycobacterium ASV_11679 and Saccharimonadales ASV_12660 in the rhizoplane and Shinella ASV_8061 in the endosphere represented the “new microbes” in the three diseased compartments . Эти новые ASV могут нести новые микробные функции, чтобы помочь растениям противостоять вторжению патогенных бактерий. Например, Pantoea asv90 и Methylobacterium asv41 были идентифицированы как «набранные новые микробы» в листьях цитрусовых и проявляли антагонистическую активность по отношению к патогену меланозы Diaporthe citri (Li et al. , 2022).

Помимо анализа изменений в микробных таксонах, изменения в микробных взаимодействиях и функциональных профилях могут дополнительно предоставить полезную информацию о влиянии изменений микробиома на здоровье растений. Наше исследование здесь показало, что сети ризоплана и эндосферы были значительно затронуты болезнью (на основе связей и средней степени) (рис. 4), что может быть связано с низким бактериальным разнообразием микробиомов ризоплана и эндосферы (рис. 1B). . Однако характер изменчивости сетей ризопланы и эндосферы сильно отличался. Микробиом ризопланы больных образцов представлял собой более интенсивную микробную сеть, чем у здоровых образцов, но микробиом эндосферы показал прямо противоположную вариацию. Было высказано предположение, что сильно связанные сети могут возникать, когда микробы сталкиваются с давлением окружающей среды, например, с инвазией патогенов (Faust and Raes, 2012). Сложные сети почвенных микробных сообществ, а не простые, приносят пользу растениям (Янг и др. , 2017). Следовательно, сложные сети, наблюдаемые в больной ризоплане, могут быть полезным сигналом для защиты растений. Хотя эндосферная сеть больных образцов в целом была простой, большее количество микробов было отрицательно связано с Ralstonia были идентифицированы в больном корне, чем в здоровом корне (рис. 4D). Микробы, имеющие положительные или отрицательные связи с патогеном, считались «антагонистами патогена» или «посредниками патогена» соответственно (Tao et al., 2021). Следовательно, микробы, принадлежащие к родам Allorhizobium-Neorhizobium-Pararhizobium-Rhizobium , Streptomyces, Burkholderiales, Achromobacter, Bosea и Flavobacterium , могут действовать как «антагонисты патогенов» (рис. 4D). Примечательно, Bosea ASV_6831, потенциальный «антагонист патогенов», был значительно обогащен (с поправкой на FDR P <0,05) в пораженной корневой эндосфере и может играть решающую роль в подавлении роста патогенных Ralstonia . Bosea spp. являются грамотрицательными палочковидными аэробными бактериями и часто выделяются из различных сред, включая почвы, отложения, корневые клубеньки растений и шлам варочных котлов (Ouattara et al., 2003; De Meyer and Willems, 2012; Safronova et al., 2015). Несколько исследований показали, что Bosea может защищать растения от грибков-фитопатогенов, таких как Botrytis cinerea и Penicillium expansum (Khoury et al., 2021). Здесь наши результаты показали, что Bosea ASV_6831 также может быть потенциальным новым «антагонистом патогенов» для фитопатогенных бактерий в соответствии с недавним исследованием, согласно которому Bosea minatitlanensis SSB-9 обладает стимулирующей рост растений и антибактериальной активностью против Ralstonia solanacearum. (Юань и др., 2022). В настоящее время мало исследований антагонистического механизма Bosea против патогенов растений, и будущие исследования должны быть сосредоточены на потенциальных взаимодействиях между Bosea и патогенами.

Анализ функции сообщества показал, что функциональные гены микробиома, участвующие в семействе спорообразования и семействе клеточного цикла, были обогащены в больной ризоплане, а гены, участвующие в семействе хемотаксиса, семействе NtrC и семействе NarL, были более распространены в больной эндосфере по сравнению с этими генами. в здоровых образцах. При инвазии патогена микробы в сообществе ризопланов могут принимать меры для увеличения скорости своего роста и стимулировать образование спорообразования, чтобы повысить свою конкурентоспособность с патогеном. Стало очевидным, что производство бактериальных токсинов контролировалось путем, регулирующим инициацию спорообразования (Bongiorni et al., 2007). Токсины, вырабатываемые микробами, могут в определенной степени подавлять рост патогенов. Увеличение количества генов в семействах NarL и NtrC в пораженной корневой эндосфере указывает на то, что доступность азота может быть важным ограничивающим фактором для растения в условиях патогенного Ральстония Вторжение. Среди функциональных генов, участвующих в хемотаксисе, ген (K03406), кодирующий MCP (метил-акцепторные белки хемотаксиса), был значительно обогащен в микробиоме пораженной корневой эндосферы, что согласуется с недавним исследованием фузариозного увядания перца чили. Гао и др., 2021). При инвазии патогенов растения могут рекрутировать отдаленные полезные микробы, активно выделяя некоторые специфические вторичные метаболиты (Schulz-Bohm et al., 2018; Yuan et al., 2018), что может привести к обогащению микробных генов MCP у больных растений. Некоторые бактерии могут использовать MCP для определения определенных концентраций метаболических соединений растений во внеклеточном матриксе, что обеспечивает направленное накопление бактерий в растении (Gao et al., 2021).

Заявление о доступности данных

Данные, представленные в исследовании, депонированы в архиве геномных последовательностей в репозитории Пекинского института геномики (https://bigd.big.ac.cn/gsa), инвентарный номер CRA007832.

Вклад авторов

PC, JT и JJ разработали эксперименты. JT, SY, ZY и QC провели эксперименты. PL, JJ, YX и ZL проанализировали данные. JT и SY написали рукопись. JJ и PC рассмотрели рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Этот проект финансировался Китайским фондом постдокторских наук (номер гранта/награды: 2021M693511) и Научно-техническим проектом провинции Хэнань (номер гранта/награды: 222102110224 и 212102110257).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечание издателя

Все претензии, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций или издателя, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpls.2022.1023837/full#supplementary-material

Ссылки

Bolyen, E., Rideout, J.R., Dillon, M.R., Bokulich, N.A., Abnet, C.C., Al-Ghalith, G.A., et al. (2019). Воспроизводимая, интерактивная, масштабируемая и расширяемая наука о микробиомах с использованием QIIME 2. Nat. Биотехнолог. 37 (8), 852–857. doi: 10.1038/s41587-019-0209-9

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Bongiorni, C., Stoessel, R., Perego, M. (2007). Отрицательное регулирование Bacillus anthracis спорообразование под действием фосфатаз семейства Spo0E. J. Бактериол. 189 (7), 2637–2645. doi: 10.1128/jb.01798-06

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Каллахан, Б. Дж., Макмерди, П. Дж., Розен, М. Дж., Хан, А. В., Джонсон, А. Дж., Холмс, С. П. (2016). DADA2: Вывод образца с высоким разрешением на основе данных ампликона Illumina. Нац. Методы 13 (7), 581–583. doi: 10.1038/nmeth.3869

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Каррион, В. Дж., Перес-Харамильо, Дж., Кордовес, В., Траканна, В., де Холландер, М., Руис-Бак, Д., и др. (2019). Патоген-индуцированная активация подавляющих болезнь функций в эндофитном корневом микробиоме. Наука 366 (6465), 606–612. doi: 10.1126/science.aaw9285

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Креггер, М. А., Вич, А. М., Ян, З. К., Крауч, М. Дж., Вилгалис, Р., Тускан, Г. А., и др. (2018). Холобионт тополя: анализ влияния растительных ниш и генотипа на микробиом. Микробиом 6 (1), 31. doi: 10.1186/s40168-018-0413-8

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Де Мейер, С.Э., Виллемс, А. (2012). Мультилокусный анализ последовательностей видов Bosea и описание видов Bosea lupini sp. nov., Bosea lathyri sp. ноябрь и Bosea robiniae sp. nov., выделенный из бобовых. Междунар. Дж. Сист. Эвол. микробиол. 62 (часть 10), 2505–2510. doi: 10.1099/ijs.0.035477-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

де Врис, Ф. Т., Гриффитс, Р. И., Найт, К. Г., Николич, О., Уильямс, А. (2020). Использование ризосферных микробиомов для производства устойчивых к засухе сельскохозяйственных культур. Наука 368 (6488), 270–274. doi: 10.1126/science.aaz5192

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Дуглас Г. М., Маффей В. Дж., Заневельд Дж. Р., Юргель С. Н., Браун Дж. Р., Тейлор К. М. и др. (2020). PICRUSt2 для предсказания функций метагенома. Нац. Биотехнолог. 38 (6), 685–688. doi: 10.1038/s41587-020-0548-6

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Дюран П., Тьергарт Т., Гарридо-Отер Р., Аглер М., Кемен Э., Шульце-Леферт П. и др. (2018). Взаимодействия микробов между царствами в корнях способствуют выживанию Arabidopsis . сотовый 175 (4), 973–983.e914. doi: 10.1016/j.cell.2018.10.020

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Эдгар, Р. К. (2010). Поиск и кластеризация на несколько порядков быстрее, чем BLAST. Биоинформатика 26 (19), 2460–2461. doi: 10.1093/bioinformatics/btq461

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Эдвардс Дж., Джонсон К., Сантос-Медельин К., Лурье Э., Подишетти Н.К., Бхатнагар С. и др. (2015). Структура, вариации и сборка корневых микробиомов риса. Проц. Натл. акад. науч. США 112 (8), E911–E920. doi: 10.1073/pnas.1414592112

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фауст, К., Раес, Дж. (2012). Микробные взаимодействия: от сетей к моделям. Нац. Преподобный Микробиолог. 10 (8), 538–550. doi: 10.1038/nrmicro2832

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Фэн К. , Чжан Ю., Хе З., Нин Д., Дэн Ю. (2019). Междоменные экологические сети между растениями и микробами. Мол. Экол. Ресурс. 19 (6), 1565–77. doi: 10.1111/1755-0998.13081

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Gao, M., Xiong, C., Gao, C., Tsui, C.K.M., Wang, M.M., Zhou, X., et al. (2021). Болезнетворные изменения в сборке растительного микробиома и функциональной адаптации. Микробиом 9 (1), 187. doi: 10.1186/s40168-021-01138-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Ху, К., Тан, Л., Гу, С., Сяо, Ю., Дэн, Ю. (2020). Сетевой анализ предполагает инвазию возбудителя увядания, связанную с невредными бактериями. Микробиомы биопленок NPJ 6 (1), 8. doi: 10.1038/s41522-020-0117-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Jiang, G., Wei, Z., Xu, J., Chen, H., Zhang, Y., She, X., et al. (2017). Бактериальное увядание в Китае: история, текущее состояние и перспективы на будущее. Фронт. Растениевод. 8, 1549. doi: 10.3389/fpls.2017.01549

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Хури Э., Абу Файад А., Карам Саркис Д., Фахс Х., Гунсалус К. К., Калласси Авад М. (2021). Микробиом ливанского дикого яблока, Malus trilobata является богатым источником потенциальных агентов биологической борьбы с грибковыми послеуборочными патогенами яблок. Курс. микробиол. 78 (4), 1388–1398. doi: 10.1007/s00284-021-02397-w

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Найтс Д., Кучински Дж., Чарлсон Э.С., Заневельд Дж., Мозер М.С., Коллман Р.Г. и др. (2011). Байесовское сообщество, независимое от культуры отслеживание источников микробов. Нац. Методы 8 (9), 761–763. doi: 10.1038/nmeth.1650

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Li, S., Liu, Y., Wang, J., Yang, L., Zhang, S., Xu, C., et al. (2017). Закисление почвы усугубляет возникновение бактериального увядания на юге Китая. Фронт. микробиол. 8. doi: 10.3389/fmicb.2017.00703

CrossRef Full Text | Google Scholar

Лю Х., Бреттелл Л. Э., Цю З., Сингх Б. К. (2020). Микробиом-опосредованная стрессоустойчивость растений. Trends Plant Sci. 25 (8),733–743. doi: 10.1016/j.tplants.2020.03.014

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Liu, H., Li, J., Carvalhais, L.C., Percy, C.D., Prakash Verma, J., Schenk, P.M., et al. (2021). Доказательства использования растениями полезных микробов для подавления почвенных патогенов. Новый Фитол. 229 (5), 2873–2885. doi: 10.1111/nph.17057

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Li, P.D., Zhu, Z.R., Zhang, Y., Xu, J., Wang, H., Wang, Z., et al. (2022). Микробиом филлосферы смещается в сторону борьбы с возбудителем меланозы. Микробиом 10 (1), 56. doi: 10.1186/s40168-022-01234-x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Лоси, К. Дж., Леннон, Дж. Т. (2016). Законы масштабирования предсказывают глобальное микробное разнообразие. Проц. Натл. акад. науч. США 113 (21), 5970–5975. doi: 10.1073/pnas.15212

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Мартин Ф. М., Уроз С., Баркер Д. Г. (2017). Союзы предков: мутуалистические симбиозы растений с грибами и бактериями. Science 356 (6340),eaad4501. doi: 10.1126/science.aad4501

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Мехиа, Л. К., Эрре, Э. А., Спаркс, Дж. П., Винтер, К., Гарсия, М. Н., Ван Баел, С. А., и др. (2014). Проникающие эффекты доминирующего лиственного эндофитного грибка на генетическую и фенотипическую экспрессию хозяина в тропическом дереве. Фронт. микробиол. 5. doi: 10.3389/fmicb.2014.00479

CrossRef Full Text | Google Scholar

Mendes, R., Kruijt, M., de Bruijn, I., Dekkers, E., van der Voort, M., Schneider, J. H., et al. (2011). Расшифровка ризосферного микробиома болезнетворных бактерий. Наука 332 (6033), 1097–1100. doi: 10.1126/science.1203980

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Мюллер Д. Б., Фогель К., Бай Ю., Форхольт Дж. А. (2016). Микробиота растений: взгляды и перспективы на системном уровне. год. Преподобный Жене. 50, 211–234. doi: 10.1146/annurev-genet-120215-034952

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Олесен Дж. М., Баскомпт Дж., Дюпон Ю. Л., Джордано П. (2007). Модульность сетей опыления. Проц. Натл. акад. науч. 104 (50), 19891–19896. doi: 10.1073/pnas.0706375104

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уаттара А.С., Ассих Э.А., Тьерри С., Кайол Дж.Л., Лабат М., Монрой О. и др. (2003). Bosea minatitlanensis sp. nov., строго аэробная бактерия, выделенная из анаэробного варочного котла. Междунар. Дж. Сист. Эвол. микробиол. 53 (ч. 5), 1247–1251. doi: 10.1099/ijs.0.02540-0

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Райнхольд-Хурек, Б. , Бюнгер, В., Бурбано, К.С., Сабале, М., Хурек, Т. (2015). Корни, формирующие их микробиом: глобальные очаги микробной активности. год. Преподобный Фитопат. 53, 403–424. doi: 10.1146/annurev-phyto-082712-102342

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Сафронова В. И., Кузнецова И. Г., Сазанова А. Л., Кимеклис А. К., Белимов А. А., Андронов Э. Э. и др. (2015). Bosea vaviloviae sp. nov., новый вид медленнорастущих ризобий, выделенный из клубеньков реликтового вида Vavilovia formosa (Stev.) корм. ЭНТОН ЛИУ. Междунар. JG 107 (4), 911–920. doi: 10.1007/s10482-015-0383-9

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Schlaeppi, K., Dombrowski, N., Oter, R.G., Ver Loren van Themaat, E., Schulze-Lefert, P. (2014). Количественное расхождение бактериальной микробиоты корня у родственников Arabidopsis thaliana . Проц. Натл. акад. науч. США 111 (2), 585–592. doi: 10.1073/pnas.1321597111

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шульц-Бом, К. , Джерардс, С., Хундшайд, М., Меленхорст, Дж., де Бур, В., Гарбева, П. (2018). Звонок издалека: привлечение почвенных бактерий летучими веществами корней растений. Исме Дж. 12 (5), 1252–1262. doi: 10.1038/s41396-017-0035-3

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Sessitsch, A., Mitter, B. (2015). Сельское хозяйство 21 века: интеграция микробиомов растений для повышения урожайности и продовольственной безопасности. Микроб. Биотехнолог. 8 (1), 32–33. doi: 10.1111/1751-7915.12180

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Simon, JC, Marchesi, JR, Mougel, C., Selosse, MA (2019). Взаимодействия хозяин-микробиота: от теории холобионтов к анализу. Микробиом 7 (1), 5. doi: 10.1186/s40168-019-0619-4

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Tao, J., Cao, P., Xiao, Y., Wang, Z., Huang, Z., Jin, J., et al. (2021). Распространение потенциально патогенных Alternaria на листьях растений определяет лиственные сообщества грибов вокруг пятна болезни. Окружающая среда. Рез. 200, 111715. doi: 10.1016/j.envres.2021.111715

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Тао Дж., Лю X., Лян Ю., Ню Дж., Сяо Ю., Гу Ю. и др. (2017). Реакция роста кукурузы на почвенные микробы и свойства почвы после удобрения различными сидеральными удобрениями. Заяв. микробиол. Биотехнолог. 101 (3), 1289–1299. doi: 10.1007/s00253-016-7938-1

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Торсвик В., Овреос Л., Тинстад Т. Ф. (2002). Прокариотическое разнообразие – величина, динамика и контролирующие факторы. Наука 296 (5570), 1064–1066. doi: 10.1126/science.1071698

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Триведи, П., Лич, Дж. Э., Триндж, С. Г., Са, Т., Сингх, Б. К. (2020). Взаимодействие растений и микробиомов: от собрания сообщества до здоровья растений. Нац. Преподобный Микробиолог. 18 (11), 607–621. doi: 10. 1038/s41579-020-0412-1

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Тернер Т. Р., Джеймс Э. К., Пул П. С. (2013). Растительный микробиом. Геном Биол. 14 (6), 209. doi: 10.1186/gb-2013-14-6-209

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

ван дер Хейден, М. Г., Хартманн, М. (2016). Сеть в растительном микробиоме. PloS Биол. 14 (2), е1002378. doi: 10.1371/journal.pbio.1002378

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Wei, Z., Hu, J., Gu, Y.A., Yin, S., Xu, Y., Jousset, A., et al. (2017). Возбудитель Ralstonia solanacearum разрушает микробиом ризосферы бактерий во время инвазии. Почвенный биол. Биохим. 118 (1), 8–17. doi: 10.1038/s41522-020-0117-2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ву С.Л., Скала Ф., Руокко М., Лорито М. (2006). Молекулярная биология взаимодействий между Trichoderma spp., фитопатогенные грибы и растения. Фитопатология 96 (2), 181–185. doi: 10.1094/phyto-96-0181

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Xiong, C., Singh, B.K., He, J.Z., Han, Y.L., Li, P.P., Wan, L.H., et al. (2021). Стадия развития растений определяет дифференциацию экологической роли микробиома кукурузы. Микробиом 9 (1), 171. doi: 10.1186/s40168-021-01118-6

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ян Х., Ли Дж., Сяо Ю., Гу Ю., Лю Х., Лян Ю. и др. (2017). Комплексное понимание взаимосвязи между почвенным микробным сообществом и бактериальным увяданием табака. Фронт. микробиол. 8. doi: 10.3389/fmicb.2017.02179

CrossRef Full Text | Google Scholar

Йилмаз П., Парфри Л. В., Ярза П., Геркен Дж., Прюсс Э., Кваст К. и др. (2014). Таксономические рамки SILVA и «Всевидового проекта живых деревьев (LTP)». Рез. нуклеиновых кислот. 42 (проблема с базой данных), D643–D648. doi: 10.1093/nar/gkt1209

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Юань, В. , Жуань, С., Ци, Г., Ван, Р., Чжао, X. (2022). Стимулирующая рост растений и антибактериальная активность культивируемых бактерий, живущих на табачном поле, против Ralstonia solanacearum . Окружающая среда. микробиол. 24 (3), 1411–1429. doi: 10.1111/1462-2920.15868

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Юань Дж., Чжао Дж., Вэнь Т., Чжао М., Ли Р., Гуссенс П. и др. (2018). Корневые экссудаты являются движущей силой переносимого через почву наследия надземной патогенной инфекции. Микробиом 6 (1), 156. doi: 10.1186/s40168-018-0537-x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Згадзай Р., Гарридо-Отер Р., Дженсен Д. Б., Копривова А., Шульце-Леферт П., Радутойу С. (2016). Симбиоз корневых клубеньков у Lotus japonicus приводит к созданию отличительных ризосферных, корневых и клубеньковых бактериальных сообществ. Проц. Натл. акад. науч. США 113 (49), E7996–e8005. doi: 10.1073/pnas.1616564113

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Zhang, Y., Xu, J., Riera, N., Jin, T., Li, J., Wang, N. (2017). Хуанлунбин нарушает процесс обогащения микробиома, связанного с корнями цитрусовых, от ризосферы к ризоплану. Микробиом 5 (1), 97. doi: 10.1186/s40168-017-0304-4

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Чжоу Дж., Дэн Ю., Луо Ф., Хэ З., Ян Ю. (2011). Филогенетическая молекулярно-экологическая сеть почвенных микробных сообществ в ответ на повышенное содержание СО ₂ . mBio 2 (4),e00122–11. doi: 10.1128/mBio.00122-11

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Гроб королевы Елизаветы II проезжает долгий путь через Шотландию

ЭДИНБУРГ, Шотландия (AP) — мрачная, царственная процессия, драпированный флагом гроб королевы Елизаветы II в воскресенье медленно везли через сельскую местность Шотландии из ее любимого замка Балморал в шотландской столице Эдинбурге.

ЭДИНБУРГ, Шотландия (AP) — мрачная, царственная процессия, драпированный флагом гроб королевы Елизаветы II в воскресенье медленно везли через шотландскую сельскую местность из ее любимого замка Балморал в шотландскую столицу Эдинбург. Скорбящие заполнили городские улицы и автомобильные мосты или выстроились вдоль сельских дорог автомобилями и тракторами, чтобы принять участие в историческом прощании с монархом, правившим 70 лет.

Катафалк проехал мимо кучи букетов и других подношений, сопровождая кортеж из семи автомобилей из Балморала, где королева умерла в четверг в возрасте 96 лет, в шестичасовую поездку через шотландские города во дворец Холирудхаус в Эдинбурге. Гроб покойной королевы был задрапирован Королевским штандартом Шотландии и увенчан венком из цветов из поместья, в том числе душистого горошка, одного из любимых королевы.

Процессия стала огромным событием для Шотландии, так как Великобритании потребовались дни, чтобы оплакать своего монарха, правившего дольше всех, единственного, которого когда-либо знало большинство британцев. Люди вышли на несколько часов раньше, чтобы занять место у полицейских баррикад в Эдинбурге. К полудню народу было человек 10.

«Я думаю, что она всегда была постоянной в моей жизни. Она была королевой, под которой я родился, и она всегда была рядом», — сказал Ангус Рутвен, 54-летний государственный служащий из Эдинбурга. «Я думаю, потребуется много времени, чтобы приспособиться к тому, что ее здесь нет».

На переполненной Королевской Миле в Эдинбурге воцарилась тишина, когда прибыл катафалк с королевой. Но когда колонна исчезла из виду, толпа спонтанно начала

«Очень исторический момент. На самом деле я потеряла дар речи, — сказала Фиона Моффат, 57-летняя офис-менеджер из Глазго. — Она была прекрасной женщиной. Прекрасная мать, бабушка. очень горжусь ею».

Когда катафалк прибыл в Холирудхаус, члены Королевского полка Шотландии в зеленых клетчатых килтах пронесли гроб мимо трех младших детей королевы — принцессы Анны, принца Эндрю и принца Эдуарда — в тронный зал, где он должен был оставаться. до полудня понедельника, чтобы персонал мог отдать последний долг.

Король Карл III и его королева-консорт Камилла отправятся в понедельник в Эдинбург, чтобы присоединиться к другой торжественной процессии, которая доставит гроб королевы в собор Святого Джайлса на городской Королевской Миле. Там гроб останется в течение 24 часов, чтобы шотландская публика могла отдать дань уважения, прежде чем он будет доставлен в Лондон во вторник.

Первой деревней, через которую проехал кортеж, был Баллатер, жители которого считают королевскую семью соседями. Сотни людей молча смотрели. Некоторые бросали цветы перед катафалком.

«Она так много значила для людей в этом районе. Люди плакали, это было потрясающе видеть», — сказала Виктория Пачеко, менеджер гостевого дома.

В каждом шотландском городке и деревне свиту встречали с уважением. Люди стояли в основном молча; одни вежливо аплодировали, другие направляли камеры телефонов на проезжающие машины. В Абердиншире фермеры выстроили маршрут почетным караулом тракторов.

По пути кортеж проезжал через места, пропитанные историей Дома Виндзоров. Среди них Дайс, где в 1975 году королева официально открыла первый в Великобритании нефтепровод в Северном море, и Файф, недалеко от университета Сент-Эндрюс, где ее внук принц Уильям, ныне принц Уэльский, учился и встретил свою будущую жену Кэтрин. .

Воскресная торжественная поездка состоялась, когда старший сын королевы был официально провозглашен новым монархом — королем Карлом III — в остальной части Соединенного Королевства: Шотландии, Уэльсе и Северной Ирландии. Это произошло на следующий день после пышной церемонии вступления на престол в Англии.

«Я глубоко осознаю это великое наследство и обязанности и тяжелую ответственность суверенитета, которые теперь перешли ко мне», — сказал Чарльз в субботу.

Незадолго до оглашения прокламации в воскресенье в Эдинбурге появился протестующий с плакатом, осуждающим империализм и призывающим лидеров «отменить монархию». Ее увезла полиция. Реакция была неоднозначной. Один мужчина крикнул: «Отпустите ее! Это свобода слова!» а другие кричали: «Имейте уважение!»

Тем не менее, в Эдинбурге раздались освистывания, когда Джозеф Морроу, лорд Лионский герольдмейстер, закончил свою прокламацию словами «Боже, храни короля!»

Это расстроило 48-летнюю Энн Гамильтон.

«Сегодня здесь собрались десятки тысяч людей, чтобы выразить свое уважение. То, что они были здесь, перебивая всякие мелочи, я думаю, было ужасно. Если бы они были так против, им не следовало бы приходить», — сказала она.

Тем не менее, это было признаком того, как некоторые, в том числе жители бывших британских колоний, борются с наследием монархии и ее будущим.

Ранее в тот же день прокламации были зачитаны в других частях Содружества, включая Австралию и Новую Зеландию.

Чарльз, несмотря на то, что он оплакивал свою покойную мать, начал работать в Букингемском дворце, встречаясь с генеральным секретарем и другими посланниками Содружества. Многие в этих странах борются как с привязанностью к королеве, так и с затянувшейся горечью по поводу своего колониального наследия, которое варьировалось от рабства и телесных наказаний в африканских школах до разграбленных артефактов, хранящихся в британских культурных учреждениях.

Премьер-министр Австралии Энтони Альбанезе, который выступает за создание австралийской республики, заявил в воскресенье, что сейчас не время для перемен, а для того, чтобы воздать должное покойной королеве. Индия, бывшая британская колония, отметила день государственного траура с приспущенными флагами.

Среди горя, охватившего Дом Виндзоров, появились намеки на возможное семейное примирение. Принц Уильям и его брат Гарри вместе со своими женами, Кэтрин, принцессой Уэльской, и Меган, герцогиней Сассекской, порадовали скорбящих возле Виндзорского замка неожиданным совместным появлением в субботу.

Гроб королевы кружным путем возвращался в столицу. После того, как гроб будет доставлен в Лондон во вторник, гроб будет перевезен из Букингемского дворца в среду в здание парламента, где он будет находиться до государственных похорон в Вестминстерском аббатстве 19 сентября. .

В Баллатере преподобный Дэвид Барр сказал, что местные жители считают королевскую семью соседями.

«Когда она поднимается сюда и проходит через эти ворота, я полагаю, что королевская часть ее жизни остается в основном снаружи», — сказал он о королеве. «И когда она входит, она может быть женой, любящая жена, любящая мама, любящая бабушка, а затем любящая прабабушка — и тетя — и будь нормальным».

У Элизабет Тейлор из Абердина были слезы на глазах после того, как катафалк проехал через Баллатер.

«Это было очень эмоционально. Это было уважительно и показало, что они думают о королеве», — сказала она. «Она, безусловно, служила этой стране, даже за несколько дней до своей смерти».

___

Кордер сообщил из Лондона

___

Следите за репортажами AP о королеве Елизавете II на https://apnews.com/hub/queen-elizabeth-ii

Дэвид Кейтон и Майк Кордер, Associated Press

Пошаговая инструкция по замене передних ступичных подшипников вашего автомобиля

Ступичные подшипники в уличных автомобилях обычно живут долго, но подшипники передних колес испытывают повышенную нагрузку из-за рулевого управления, поэтому на старинных автомобилях может потребоваться их замена в какой-то момент.

Классический тест заключается в том, чтобы поднять переднюю часть автомобиля домкратом, установить его на подставки, взяться за каждое колесо в положении «6 часов» и «12 часов» и осторожно раскачать его. Если вы чувствуете люфт, необходимо отрегулировать ступичный подшипник. Если вы не можете отрегулировать люфт или если при вращении вы слышите и чувствуете шум, пришло время заменить подшипники.

На многих старинных автомобилях замена подшипников передних колес синергична с заменой передних роторов. Это связано с тем, что передние роторы часто находятся за передними ступицами, а это означает, что для замены роторов вам нужно снять ступицы с передних шпинделей, после чего подшипники практически у вас в руке. Итак, если вам нужно выполнить работу переднего тормоза, проверьте ступичные подшипники.

Недавно мне нужно было починить тормоза и подшипники на моем Lotus Europa и на одном из моих BMW 2002 года. Два ремонта были почти идентичны. Я покажу его для BMW просто потому, что фотографии получились лучше, и укажу на несколько мелких отличий.

Компоновка передней ступицы на многих старинных автомобилях такова, что есть внутренний и внешний подшипники, каждый из которых вращается в кольце, запрессованном в ступицу. Внутренний подшипник защищен запрессованным уплотнением, внешний подшипник — пылезащитным колпачком. Ступица в сборе — ступица плюс ротор плюс подшипники — надевается на шпиндель, выступающий под прямым углом из стойки, и удерживается на месте корончатой ​​гайкой, названной так потому, что на ней есть выемки, похожие на зубцы на парапете парапета. замок или вершина ладейной шахматной фигуры. Одна из выемок совмещена с отверстием, просверленным в конце шпинделя. Для фиксации гайки используется шплинт.

Вы начинаете со снятия суппорта. Если вы также заменяете колодки, проще всего сначала выбить штифты из суппорта, прежде чем откручивать его от стойки. Обратите внимание, что оригинальные тормозные колодки и колодки на старинных автомобилях могут содержать асбест, поэтому ношение пылезащитной маски является разумной мерой предосторожности при работе с компонентами тормозной системы. Снимите болты, крепящие суппорт к стойке. Также может быть болт, крепящий кронштейн тормозной магистрали к стойке. Установите суппорт на рычаг управления или подвесьте его на пружине с помощью стяжки.

Затем снимите пылезащитный колпачок с помощью отвертки, чтобы открыть корончатую гайку.

Выпрямите шплинт острогубцами, снимите его, а затем отвинтите гайку со шпинделя. Он не должен быть тугим, но если это так, гаечный ключ может запустить его. Снимите толстую прокладку, которая находится за гайкой.

Затем потяните узел ступицы и ротора вперед и снимите со шпинделя, но имейте в виду, что внешний подшипник колеса может выскользнуть, так что будьте готовы поймать его. Выложите все на чистый картон или бумажное полотенце.

Возьмите корончатую гайку, прокладку и пылезащитный колпачок, очистите их и положите туда, где вы не будете пнуть их по полу гаража.

Затем возьмите бумажное полотенце и очистите шпиндель. Осмотрите две плоские поверхности. Сами подшипники фактически не работают на этих поверхностях. Вместо этого они служат посадочными поверхностями для колец в центре подшипниковых узлов. Однако, если эти поверхности сильно изрыты или выщерблены, внутренние кольца подшипника могут не сидеть на них прочно, что приведет к раскачиванию всего подшипника. Если это так, и если после замены подшипников и их регулировки в колесе все еще есть существенный люфт, возможно, потребуется заменить весь корпус стойки. К счастью, это случается крайне редко и обычно происходит только из-за катастрофического выхода из строя подшипника, поэтому, когда вы чувствуете люфт, который невозможно отрегулировать, вы заменяете подшипники.

Начните разборку ступицы, вытащив наружный ступичный подшипник. Пока не выбрасывайте его, если вам нужно сравнить его с новым подшипником.

Чтобы снять внутренний ступичный подшипник, сначала нужно вынуть уплотнение из задней части ступицы. Вы заменяете его, так что не беспокойтесь о его уничтожении. Обычно помогает длинная отвертка, качающаяся в точке опоры, как ручка молотка. Вытащив уплотнение, извлеките внутренний ступичный подшипник. Опять же, держите его немного на случай, если вам нужно будет сравнить размеры.

Быстро очистите внутреннюю часть ступицы и обоймы подшипника бумажным полотенцем, чтобы вы могли видеть, что к чему. Вы должны увидеть меньшее внешнее кольцо подшипника, вдавленное в переднюю часть ступицы, и большее внутреннее кольцо, вдавленное в заднюю часть. Если вы посмотрите внутрь ступицы с обеих сторон, вы должны увидеть две выемки позади каждой дорожки, которые позволяют вам выбить их. Используя молоток и выколотку по вашему выбору (например, старую отвертку, изношенный удлинитель с трещоткой на четверть дюйма или даже настоящий пробойник), работая над одной гонкой за раз, выбейте ее, поочередно постукивая по ней. две выемки. Затем переходите к другой расе. Неважно, что вы сделаете первым.

Если вы заменяете роторы, самое время снять старые. У меня 2002 года они крепились четырьмя 8-мм болтами с шестигранной головкой, тогда как на Lotus они крепились с помощью традиционных болтов. В любом случае, это один из тех случаев, когда владение ударным гайковертом делает это настолько простым, что это почти несправедливо. Если у вас его нет, возможно, вам придется зажать старый ротор в тисках, чтобы удерживать его неподвижно. Вытащите болты и их стопорные шайбы, затем отделите ротор от ступицы. Если он пролежал там 40 лет, возможно, вам придется уговорить его несколькими ударами молотка.

Распылите на все выбранное вами чистящее средство и тщательно протрите. Затем, как вы сделали со шпинделем, осмотрите поверхности, на которых сидят дорожки; Я никогда не видел ни одного разрушенного, но нередко можно увидеть, как какие-то выдолбы из гонок то появляются, то исчезают. Если выемки в одной области ярко выражены, вы можете убрать высокие точки с помощью Scotch-Brite, но не сходите с ума и не рискуете получить плотную посадку.

Откройте пакет с новым подшипником. Он должен содержать подшипник и гонку. Неважно, какой подшипник вы выберете: внутренний или внешний. Снимите обойму и положите подшипник на чистое бумажное полотенце или пластиковый лист.

Возьмите новую расу и поместите ее в ступицу. Выровняйте его, затем осторожно постучите по нему резиновым молотком, или молотком и деревянным бруском, или молотком и хоккейной шайбой, затем остановитесь и внимательно осмотрите его, чтобы определить, входит ли он во взведенный курок, что почти всегда происходит. Если он плохо взведен, он может выдолбить сопрягаемую поверхность, поэтому вы хотите исправить это как можно быстрее. Аккуратно постукивайте по высокой стороне, пока она не выровняется, затем продолжайте постукивать, пока она не окажется на одном уровне с верхней частью втулки.

Когда обойма окажется на одном уровне с верхней частью втулки, переключитесь с деревянного блока на использование гнезда, диаметр которого чуть меньше диаметра обоймы. Вам придется выяснить это путем проб и ошибок, так как точный внешний диаметр варьируется от гнезда к гнезду, но в модели 2002 года я использовал головку 1-13/16 дюймов на большем внутреннем кольце и 1-3/. 8-дюймовая головка на меньшем внешнем кольце.

Когда гонка полностью установлена, вы должны услышать, как звук меняется со звона на глухой стук, когда вы постукиваете по ней, но вы также должны проверить, перевернув втулку и внимательно осмотрев, где задняя часть раса видна через прорези. Убедитесь, что позади гонки нет места. Затем проделайте то же самое с другой обоймой подшипника. Теперь у вас должны быть установлены как внутренняя, так и внешняя расы.

Далее начинается самое интересное: упаковка подшипников. Мало что может быть более первобытным, элементарным и интимным с автомобильной точки зрения, чем сальниковые подшипники. Используйте любую смазку, которая вам удобна. Как и в случае с моторным маслом, многие люди доверяют определенным смазкам. Я не нашел, что это имеет значение. Традиционная коричневая 100-процентная смазка на нефтяной основе, черная полусинтетика или красная 100-процентная синтетическая смазка подходят, если на упаковке указано «автомобильные подшипники» среди областей применения.

Вымойте руки или наденьте резиновые перчатки. Я бы посоветовал носить костюм Tyvek, так как вы, вероятно, испачкаете все, что на вас надето. Возьмите большой шарик жира и положите его на ладонь. Затем возьмите подшипник и вдавите его в комок смазки на ладони, как будто вы черпаете ложкой мороженое, и нанесите смазку на каждую щель вокруг обода подшипника. Пополняйте смазку на ладони по мере необходимости. Сделайте это как для передней, так и для задней части подшипника.

После того, как вы заполнили щели, втисните внешнюю окружность подшипника в ладонь, нанося смазку на отдельные ролики. Убедитесь, что он хорошо упакован. Помните: вы, скорее всего, даете этому подшипнику единственную смазку, которую он будет получать десятилетиями. Когда подшипник будет хорошо упакован, положите его на новое чистое бумажное полотенце. Проделайте это как с внутренним, так и с внешним подшипником.

При установке подшипников важен порядок. Сначала вы должны вставить внутренний подшипник, затем установить уплотнение подшипника, чтобы зафиксировать его на месте, затем надеть весь узел ступицы на шпиндель, затем вставить внешний подшипник на место, а затем зафиксировать его проставкой и гайкой.

Нанесите каплю смазки на внутреннюю обойму подшипника, затем установите внутренний подшипник внутрь нее. Возьмите внутреннее уплотнение ступичного подшипника и установите его так же, как вы установили обоймы подшипника, постукивая по нему и стараясь не взводить его, а только заподлицо с внутренней поверхностью ступицы. Не забивайте дальше. На BMW 2002 года было показано резиновое сальниковое уплотнение, но у Lotus было фетровое уплотнение старой школы, где войлок был снаружи, смазанный и предназначенный для легкого контакта с основанием шпинделя. Необходимо было позаботиться о пробной посадке узла ступицы, чтобы убедиться, что зазор войлочного уплотнения достаточен.

Далее идут новые роторы. Прикрепите их, стараясь положить собранную ступицу на чистую поверхность.

Когда внутренний подшипник зафиксируется на месте уплотнением, переверните ступицу и смажьте внешнюю обойму подшипника консистентной смазкой. Удалите всю смазку с роторов.

Следующим шагом является надевание ступицы на шпиндель, но перед этим возникает вопрос, должно ли отверстие ступицы быть заполнено смазкой. Обратитесь к руководству по ремонту автомобиля. На модели 2002 года смазки, залитой в подшипники и пылезащитный колпачок, считалось достаточно, но на Lotus в инструкции сказано, что центральное отверстие ступицы заполняется смазкой примерно наполовину.

Наденьте узел ступицы и ротора на шпиндель, осторожно, но сильно нажимая на него, чтобы внутренний подшипник сел на шпиндель. Наденьте внешний подшипник на конец шпинделя в его дорожку, затем наденьте прокладку на конец шпинделя. Накрутите корончатую гайку на конец шпинделя. Будьте осторожны, чтобы не перепутать его. После того, как гайка навинчена, закрутите ее рукой до упора, а затем осторожно используйте гаечный ключ, так как внутреннее и внешнее кольца подшипника иногда должны сидеть на шпинделе. Это должно быть очевидно, когда они сидят. Не прилагайте никакого реального крутящего момента к гайке. Вы не пытаетесь его затянуть.

Далее вам нужно найти зазор в корончатой ​​гайке, который лучше всего совпадает с отверстием в конце шпинделя. В интернете полно историй людей, которые за сотню километров прогорали ступичные подшипники, перетягивая их. Меня всегда учили затягивать гайку вручную, а затем отворачивать ее, чтобы выровнять ее с отверстием, но друг указал мне, что заводское руководство 2002 года требует, чтобы гайка была достаточно затянута, чтобы прокладку можно было перемещать. поддев его отверткой. Проверьте свое руководство для правильной процедуры.

В этот момент, прежде чем застегнуть все пуговицы, я предпочитаю примерить колесо, покрутить его и проверить на люфт. При этом следите за тем, чтобы грязь не попала в открытый подшипник (можно осторожно постучать по крышке подшипника на место). Колесо должно вращаться плавно и тихо. Возьмите колесо в 6 и 12 и нажмите и потяните его. Люфта быть не должно, или только небольшой намек на люфт.

Наконец, вставьте шплинт в прорезь и отверстие и согните его достаточно далеко, чтобы он не ударялся о крышку подшипника. Нанесите немного смазки на крышку и вставьте ее на место.

Если вы заменяете тормозные колодки, сейчас самое время. Затем переустановите суппорт.

Поставь колесо на место. В последний раз толкните/потяните на 6 и 12, чтобы проверить люфт.

Хотя вам не обязательно делать ступичные подшипники с обеих сторон одновременно (это не похоже на роторы и колодки), обычно это считается хорошей практикой.